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文献和实验LightCycler通过实时荧光PCR技术进行DNA甲基化分析
,在饱和的DNA结合染料存在的情况下进行PCR反应,在扩增后进行高分辨熔解曲线分析,HRM分析的特点为可以区分扩增产物中少至1个碱基变化的序列差异,从而通过尿嘧啶/胞嘧啶的差异判断扩增子来源于甲基化还是非甲基化的初始模板变异体。MS-HRM可评估引物之间整条扩增子的甲基化状态。由于它是一种闭管方法,可初步快速评估甲基化。相比于传统的方法,它的成本低廉,分辨率高,通量灵活(最多一次筛查384个样本,最少几个样本),并且准确率大大提升。结合标准品的特征熔解曲线,还可以对样本中存在的甲基化DNA比率进行基本
生于林间、林边、灌木丛中、山沟或山阴湿地。人工栽培可选富含腐殖质的背阴坡地或稀疏林地。除挖取野生细辛移栽或用根状茎分株法繁殖外,也可用种子直播或育苗移栽。直播有缩短生长期、减少菌核病为害、省工、增产等优点。在人参后作地上栽培,有速生高产效果。生长3~5年后收获,8~9月采收,阴干。加工时忌水洗、暴晒,否则降低辛香味,影响品质。 北细辛含挥发油约 3%,其主要成分是甲基丁香酚,还有黄樟醚、α-或β-蒎烯、优葛缕酮等。中医学上以全草入药,功能祛风、散寒、止痛、行水、开窍,主治感冒风寒、头痛
化水平。它由Kuo等1980年[18]首次报道。过程是将DNA样品先经盐酸或氢氟酸水解成碱基,水解产物通过色谱柱,结果与标准品比较,用紫外光测定吸收峰值及其量,计算5mC/(5mC+5C)的积分面积就得到基因组整体的甲基化水平。这是一种检测DNA甲基化的标准方法。但它需要较精密的仪器。Fraga等2002年[19]运用高效毛细管电泳法(HPCE)处理DNA水解产物,以确定5mC的水平。与HPLC相比,HPCE更加简便、快速、经济。HPLC及HPCE测定基因组整体DNA甲基化水平的敏感性均较高
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