3. 单克隆抗体亚型鉴定
a. 将待测样本适当稀释加入板条样品孔中,50 μL/孔。
b. 无需孵育,将 1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP 加入样品孔中,50 μL/孔。混匀器上轻轻混匀,也可用手轻轻敲击板架两侧 1 min。
c. 盖上封板膜,室温孵育 1 h。
d. 弃去孔内液体,1×PBST 洗板 3 次,吸水纸上拍干。
e. 将现配的显色液加入孔中,100 μL/孔。
注:显色液配方,A 液:B 液=1:100,即 10μL A 液与 1 mL B 液混合,混匀后立即使用。
f. 室温避光显色 10-20 min。每孔加入终止液,100 μL/孔。
g. 结果判读。结果可以对照下图以肉眼判定,也可以通过酶标仪读取 OD450。颜色最深或是 OD 值最高孔对应的即为相应
亚型。
注:每个样本应该在 A-F 中有一个阳性孔(即是样本重链类型),G 和 H 中有一个阳性孔(即是样本轻链类型)。
注意事项
1. 显色液应临用前配制,即配即用。显色液 A 液应避光保存。
2. 余下板条应密封保存。如短期不用,可置于-20°C 保存。