5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7 种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5. Western 实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、Tubulin。
6. 更多蛋白提取常见问题分析等资料可以联系本公司索取。
1. 提取液制备:每500ul 冷的总蛋白提取液中加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取 5-10×106 个细胞①,在4℃,1000rpm 条件下离心5-10 分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每 5×106 个细胞中加入500ul 冷的总蛋白提取液,混匀后,在4℃条件下振荡15-20 分钟。
5. 在 4℃,14000rpm 条件下离心15 分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到总蛋白。
7. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
注:
① 细胞数量根据实验情况调整,每次的裂解液用量并不是一定的,请根据实际情况调整。
② 建议用 BCA 法进行蛋白定量。
③ 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
组织总蛋白提取:
1. 提取液制备:每500ul 冷的总蛋白提取液中加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取 100mg 组织样本剪碎,加入总蛋白提取液,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体①。
3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中,在4℃,10000rpm 条件下离心5 分钟。
4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到总蛋白。
5. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
注:
① 用液氮研磨的方法更佳。
使用本产品发表的部分新文献:
● Pin Huan, Hongxia Wang et al. Identification of differentially expressed proteins involved
in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Journal of Proteomics 2012 (IF=5.074)
● Chao Wang, Xin Yue et al.
Shrimp MyD88 responsive to bacteria and white spot syndrome virus
Fish & Shellfish Immunology 2012 (IF=3.322)
● Pin Huan et al. Comparative proteomic analysis of challenged Zhikong scallop (Chlamys
farreri): A new insight into the anti-Vibrio immune response of marine bivalves
Fish & Shellfish Immunology 2011 Volume 31, Issue 6 , Pages 1186-1192 (IF=3.322)
● Liu Tao, Chen Suhua et al. In vitro study on human cytomegalovirus affecting early
pregnancy villous EVT's invasion function
Virology Journal 2011, 8:114 (IF=2.55)