细胞滤/筛网 100um（BD Falcom）

酵母双杂交实验常见问题及其解决方法

Trp平板上，转化效率应该在1 x105 colonies/mg DNA以上。 4.杂交效率不高，该如何处理? 在杂交中，预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时，应挑选大的、新鲜的克隆进行培养，经过离心和重悬后，再使用血球计对细胞进行计数。密度应该在1 x109/ml。 一个甚至两个融合蛋白对酵母细胞有毒。你可以通过重组方法来减轻毒性，同时又能保证蛋白的相互作用。或者使用表达水平较低的载体。也可以在琼脂平板或滤膜上进行杂交。但同时必须作杂交对照实验。

一篇搞定 IP、co-IP 实验

或者互作蛋白复合物（红色+黄色）洗脱 Step 5：分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验，先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照：证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白（IP）或者互作蛋白对（co-IP，比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y），即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照：用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了，固然是值得高兴

酵母双杂交实验常见问题

，然后重新检测其是否自激活，但要注意重组也有可能破坏蛋白之间的互作。3.转化效率太低怎么办？可以采用以下方法解决：1)检测一下DNA的纯度，如果可以的话，重新用乙醇纯化。2)DNA-BD/诱饵蛋白很可能是有毒的。3)不适当的培养基，重新配制培养基，并做对照转化。4)检测pGBT9对照载体的转化效率，放置于SD/–Trp平板上，转化效率应该在1 x105 colonies/mg DNA以上。4.杂交效率不高，该如何处理？在杂交中，预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时，应挑选