用途:
本试剂用于测定人血清中α-羟丁酸脱氢酶的酶活浓度。
测定原理:
α-HBDH
α-酮丁酸 + NADH + H+ α-羟丁酸 + NAD+
α-羟丁酸脱氢酶试剂盒使用说明书试剂盒主要成分与浓度:
试剂
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主 要 成 分
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实验浓度
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R1
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NADH |
0.18mmol/L
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R2
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酮丁酸
磷酸缓冲液 (pH7.5)
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3.3mmol/L
50mmol/L
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试剂稳定性:
原装试剂在2~8℃避光保存,有效期12个月。
复溶后在2~8℃避光保存可稳定72小时,在15~25℃可稳定8小时。
样品:
新鲜无溶血血清、肝素血浆或EDTA血浆。
操作步骤:
波长;340nm
温度:25℃,30℃,37℃
比色杯光径:1cm
取一定量R2(参看R1瓶签)复溶1瓶R1,溶解后即为工作液。工作液预先保温至测试温度。
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空白管
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样品管
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工作液
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1.00ml
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1.00ml
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蒸馏水
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0.02ml
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—
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样 品
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—
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0.02ml
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混合均匀,在反应温度保温30秒,读取初始吸光度,同时开始计时,在精确1,2,3分钟时,分别读取吸光度,确定每分钟平均吸光度变化(△A/分)。
α-羟丁酸脱氢酶试剂盒使用说明书计算:
α-HBDH(U/L) = (△A样品/分-△A空白/分)×F
Vt
F = ×1000 = 8095
Vs×消光系数
Vt = 反应总体积 Vs = 样品体积
NADH在340nm波长下毫克分子消光系数 = 6.3
参考值:
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25℃
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30℃
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37℃
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U/L
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55~140
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65~165
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72~182
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参考文献:
Elliott B A,et al.Clin.Sci,1963,24:343
各医院应根据本地区实际情况建立自己的正常值。
线性上限:
α-HBDH活力可达1000U/L(37℃)
α-羟丁酸脱氢酶试剂盒使用说明书注意事项:
1.当△A/分大于0.130时,应取0.1ml样品加0.3ml生理盐水稀释,再重新测定,结果乘以4。
2.试剂空白吸光度小于1.000时,勿用。
3.若试剂在全自动生化仪上使用,可参照本公司提供的相应型号仪器的参数,在公司技术人员的指导下使用。
4.本产品仅用于体外诊断,内含叠氮钠,避免直接接触皮肤和眼睛,切勿吞咽。
5.本产品应在2~8℃条件下贮存,避免在2~8℃以上及0℃以下存放。