超氧化物歧化酶定量试剂盒,比色法 Colorimetric Superoxide Dismutase (SOD) Assay Kit
超氧化物岐化酶(SOD)是一类可以催化超氧化物的通过歧化作用产生氧气和TWO氧水。超氧化物是细胞内主要的活性氧之一。它本质上与神经退行疾病,缺血再灌注损伤,动脉粥样硬化和衰老病理学变化相关联。SODs几乎是所有暴露在超氧化物自由基下细胞中最重要抗氧化剂。事实上。大鼠缺少SOD1导致广泛的病理现象,包括肝细胞癌,加速与年龄相关的肌肉的损失,早期白内障发病率,以及减少寿命。过表达SOD能保护凋亡中鼠纤维肉瘤细胞促进细胞的分化。
产品描述 Amplite SOD比色法检测试剂盒提供了一种快速灵敏的方法,来检测溶液中SOD的活性。试剂盒内的SOD底物为SOD orange,其吸收光为560nm,SOD抑制超氧化物与SOD orange反应,因此降低其在560 nm吸收光,相应的,SOD orange 在560nm处吸收光的降低与SOD活性成正比。本试剂盒适用96或384微孔板分析。
Amplite 比色法超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测超氧化物歧化酶的试剂盒,超氧化物歧化酶(SOD)是一类催化超氧化物歧化成氧和过氧化氢的酶。超氧化物是细胞中主要的活性氧物质之一。它与神经退行性疾病,缺血再灌注损伤,动脉粥样硬化和衰老有关。SOD是几乎所有暴露于超氧自由基的细胞的重要抗氧化防御剂。据报道,缺乏SOD1的小鼠出现了广泛的病理,包括肝细胞癌,年龄相关的肌肉质量减少,早期白内障发病率和寿命缩短。SOD的过表达保护小鼠纤维肉瘤细胞免于凋亡并促进细胞分化。
Amplite 比色超氧化物歧化酶检测试剂盒为测量SOD提供了一种快速灵敏的比色法。如图所示,黄嘌呤通过黄嘌呤氧化酶(XO)转化为超氧自由基离子(O2-·),尿酸和过氧化氢。超氧化物与ReadiView SOD560发生反应,生成吸收560nm左右的产品。SOD竞争ReadiView SOD 560与超氧化物的反应,从而减少560 nm处的吸收。 ReadiView SOD 560在560 nm处的吸收减少与SOD活性成正比。该试剂盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行,并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。产品说明书
96孔板测定示例
概述
SOD标准品或测试样品(50μL)
添加SOD测定混合物(25μL)
添加酶反应混合物(25μL)
在室温下孵育10-30分钟读取560 nm处的吸光度
注意:在开始实验之前,将所有试剂盒组分解冻至室温。
操作方法
1.Parepare系列SOD(0至100 U / mL)标准溶液:
1.1将50μL测定缓冲液(组分E)加入到SOD标准品(组分D)的小瓶中以制备10kU / mL SOD储备溶液。
注意:未使用的SOD溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。
1.2在990μL分析缓冲液(组分E)中加入10μL10kU / mL SOD溶液,得到100 U / mL SOD溶液。取100μL的100 U / mL SOD溶液进行1:10连续稀释,然后进行1:3稀释,得到10,3,1,0.3,0.1,0.03 U / mL SOD标准溶液。
1.3如说明书中表1和2所述,将SOD标准品和含SOD的测试样品添加到96孔白壁/透明底或透明微孔板中。
2.Parepare SOD测定混合物1:
2.1将2.5 mL测定缓冲液(组分E)加入ReadiView SOD560(组分A)瓶中,充分混合。
2.2将50μL50X黄嘌呤(组分B)加入组分A(来自步骤2.1)的瓶中以制备SOD测定混合物。
注意:SOD测定混合物应在实验前准备好,避光。 测定混合物不稳定,应丢弃未使用的部分。
3.Parepare SOD测定混合物2:
3.1将50μL测定缓冲液加入到黄嘌呤氧化酶(组分C)的小瓶中,并将50μL黄嘌呤氧化酶原液转移到2.5mL测定缓冲液(组分E)中以制备SOD测定混合物2,充分混合。
3.1将25μLSOD测定混合物1(来自步骤2.2)添加到SOD标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(参见步骤1,说明书表1和2)。
3.2将25μLSOD测定混合物2(来自步骤3)加入SOD标准品,空白对照和测试样品(来自步骤4.1)的每个孔中。
注意:对于384孔板,将25μL样品,12.5μLSOD测定混合物1和12.5μLSOD测定混合物2加入每个孔中。
3.3在室温下孵育30-60分钟。
3.4监测550至560nm的吸光度强度。
参考文献
Intercomparative investigation of the total phenols, total flavonoids, In vitro and In vivo antioxidant activities of capparis Cartilaginea (Decne.) maire and weiller and Capparis Ovata Desf. from Jordan
Authors: Mahmoud A Al-Qudah, Safwan M Obeidat, Riyadh Muhaidat, Bahaa Al-Trad, Hala I Al-Jaber, Jamil N Lahham
Journal: Pharmacognosy Magazine (2018): 154