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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 克隆性：
单克隆
- 抗体英文名：
Anti-Annexin V
- 抗体名：
膜粘连蛋白 V抗体
将膜粘连蛋白5进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。
其意义：检测早期凋亡的细胞，同时可区分活细胞和坏死细胞
磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。
碘化丙啶（propidine iodide，PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。
将Annexin-V进行荧光素标记，检测早期凋亡的细胞
方法：
1 悬浮细胞的染色：将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞（0.5～1×106）用PBS洗2次，加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V（20ug/ml）10ul，室温避光30min，再加入PI（50ug/ml）5ul，避光反应5min后，加入400ul Binding Buffer，立即用FACScan进行流式细胞术定量检测（一般不超过1h）， 同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。
2 贴壁培养的细胞染色：先用0.25%的胰酶消化，洗涤、染色和分析同悬浮细胞。
3 爬片细胞染色：同上，最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。
注意事项：
1 整个操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞。
2 操作时注意避光，反应完毕后尽快在一小时内检测
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文献和实验电镜技术的发展，会有更多的膜蛋白结构得到解析，助力后续的功能研究和药物发现。 有了冷冻电镜这把利器之后，真正制约膜蛋白研究的其实是样品的制备。 常规的膜蛋白制备流程如下： 图 1. 常规的膜蛋白制备流程图 特点是： 蛋白含量低 收率低 活性易降低 纯化过程需要优化 去垢剂 天然表达的膜蛋白含量极低，很难纯化。就算是重组表达体系，生产出的膜蛋白通常具有细胞毒性，因此表达量也远低于常规重组蛋白。在整个纯化过程中都需要选择合适的去垢剂才能使膜蛋白本身保持空间构象和活性。 去垢剂可分为三种： 表
亦称为伞膜（ web）。是头足类在腕与腕之间的膜状构造。在十腕类（乌贼）是不明显的，但在八腕类（章鱼），则以宽而薄的膜扩展着。是前足或上足的延伸。
随着分子诊断学的不断发展，有人认为膜将逐渐失宠。然而，事实绝非如此。在体外诊断(IVD)的发展过程中，膜材料和微孔材料一直长期占据中心地位。硝酸纤维、尼龙等材料制作成膜，这些膜的使用促进了以抗原抗体相互作用为基础的免疫检测的发展，并使这些测定获得了今天所拥有的市场优势地位。膜的使用也使免疫诊断学向侧流照护点检验的改进成为可能，比如今天人们所熟悉的家用孕检工具形式。但是，随着分子诊断学逐渐商业化发展，一些分析家认为膜的作用必将逐渐消失。他们认为，基于抗原抗体相互作用的免疫检测将会被新兴的以核酸
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