GT1-7细胞、GT17细胞、GT1-7、GT17、小鼠下丘

细胞介绍

GT1-7是一种永生化的成熟小鼠下丘脑GnRH神经元细胞系。通过将含有与SV40 T-抗原癌基因编码区偶联的GnRH基因启动子区的转基因导入转基因小鼠，产生了永生化GnRH神经元。从一只小鼠中取出所得的下丘脑前部肿瘤，分离并克隆细胞。GT1-7是成熟分化的Gnrh神经元的克隆系，表现出高水平的Gnrh1 mRNA，并在去极化反应中分泌GnRH。促性腺激素释放激素(GnRH)是一种神经肽，由下丘脑内的GnRH神经元合成和释放，是正常生殖发育和功能所必需的。下丘脑嘴侧部GnRH神经元的稀少和分散分布使得对这些细胞的生物学研究变得困难。GT1-7细胞可用作下丘脑GnRH分泌神经元的体外模型。

细胞特性

1） 来源：小鼠  下丘脑前部肿瘤

2） 形态：成纤维细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

一．培养基及培养冻存条件准备

1） 准备DMEM/F12 (推荐：iCell-0005)基础培养基，优质胎牛血清8 %，HS(马血清) 2%（两种血清均需灭活，灭活方法： 42度，30分钟），P/S 1%

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

该细胞为轻微贴壁细胞，传代可以参考以下方法

1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

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