生长抑素放免药盒操作说明书

生长抑素放免药盒操作说明书

S.S（HY-10172）RIA KIT

生长抑素（Somatostatin S.S）为脑肠肽，具有广泛的生理作用。本药盒用于血浆提取液，组织提取液和脑脊液中S.S含量的测定。请认真阅读说明书并严格实行。

药盒组成及配制：冻干品-20℃保存，一经溶解应避免反复冻融。液体试剂4℃保存。

1、缓冲液1瓶。

2、免疫分离剂（第二抗体）1瓶。

3、标准品2瓶，浓度为2560pg/瓶，一瓶用做标准曲线，一瓶用做回收试验。

4、¹²⁵I - S.S 2瓶，用前每瓶加缓冲液 ml溶解。

5、S.S抗体2瓶，用前每瓶加缓冲液 ml溶解

6、去激素血浆1瓶。

7、牛血清白蛋白（BSA）：0.2g。

8、EDTA-Na2，抑肽酶：自备。

9、生理盐水（含0.2%BSA），自备。用于复溶血浆提取样本。

生长抑素放免药盒操作说明书 血浆标本的收集：

1、静脉血2ml ，置于4℃预冷的试管内，每个试管含水量10% EDTA-Na2 30ul

及抑肽酶500KIU/ 40 ul。（我公司可提供抑肽酶160元/瓶）

1、 低温离心，1500g×15分钟。

2、 将血浆标本按0.5ml/管分装于玻璃试管中，-20℃贮存备测（可贮存3个月）。

血浆样本的提取：

1、于0.5ml血浆中加入50ul冰醋酸，混匀，逐滴加入2ml 4℃预冷丙酮，边滴边摇，

最后在旋转混匀器上混匀，提取管（瓶）不能用塑料管（瓶）！！！。。

2、4℃ 离心1500g×15分钟。

3、将上清液倒入16×100mm玻璃试管（或西林瓶）中。 沉渣中加入80%4℃预冷丙酮1ml

（80ml 丙酮加20ml蒸馏水）。摇匀后，再次离心1500g×10分钟。

4、合并两次上清液，加蒸馏水0.5ml，乙酸乙酯-合液（3：1 V/V）3ml，加塞，上下震摇约50次。静置或离心分层，吸去上层有机溶剂，保留水相（注意勿吸去水溶液，可保留少量乙酸乙酯液）。

5、将水溶液管（瓶）置凉风下（空调或电扇）将有机溶剂吹掉后所余液体用冷冻抽干机抽干。若无冷冻抽干机亦可于40℃水浴中，用氮气或压缩空气吹干。干燥后可密封置4℃冰箱保存，备一周内测定（或-20℃保存2­—3个月）

组织的提取：

取适宜大小的组织快，立即称重后于煮沸的生理盐水（1-2ml）中煮沸3分钟，冷却后加1N冰醋酸0.5ml于匀浆器中制成匀浆，再用1N NaOH 0.5ml中和，离心3500转/分，20分钟（最好是低温离心）取上清液贮存于-20℃以下待测（样本可保存2—6个月）。

回收试验：

1．取S.S标准一瓶，加缓冲液1 ml稀释，浓度度为2560，然后倍比稀释成浓度为1280、

640、320pg/ml。

2．回收管：取试管3支，分别加入浓度为640、1280、2560 pg/ml的S.S标准液0.1ml，

于每管中加去激素人血浆0.5ml混合，按血浆标本提取法（1~6）与标本管同时进

行提取。

生长抑素放免药盒操作说明书放免分析：

1、自冰箱取出吹干的标本管，回收管，加入生理盐水0.5ml/管（含0.2%BSA）重新溶解

（组织提取直接进行）。

2、 S.S 标准1瓶每瓶加1 ml缓冲液稀释成浓度为5120 pg/ml，然后倍比稀释成浓度为

1280、640、320、160、80、40、20、10pg/ml，共8管。

3、 操作步骤： （双管重复测定）

S.S RIA 加液程序 （单位：ul ）

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试 剂 T NSB B₀ S₁~S₈ 回收管 样本管

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标本提取液 —— —— —— —— —— 200

回收管提取液 —— —— —— —— 200 ——

缓 冲 液 —— 400 300 200 100 100

标 准 品 —— —— —— 100 —— ——

抗 体 —— —— 100 100 100 100

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充分混匀，4℃ 放置24小时

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¹²⁵I- S.S 100 100 100 100 100 100

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摇匀4℃ 温育48小时

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分 离 剂 —— 600 600 600 600 600

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混匀，室温放置15分钟后，3500转20转/分4~10℃离心，弃上清。测定沉淀cpm数。

结果计算：

以N/T、B/T计算NSB、S₀结合百分率，以B/B₀计算标准及待测物结合百分率，

在半 对数座标纸上绘制标准曲线，并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。

回收率= 回收管含量实测值×2.5 ÷回收时加入的S.S含量 × 100%

标本S.S浓度（pg/ml）=标准管测值÷2÷回收率。其中“2”为容积校正系数。

标本S.S正常参考值：空腹10.1±7.2pg/ml(X±SD).正常人≤30pg∕ml

本月药盒参考数据：

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T NSB S₀ S₁ S₂ S₃ S₄ S₅ S₆ S₇ S₈

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CPM

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N/T% B₀/T% B/ B₀ %

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