P物质放免试剂盒操作说明书
S.P(HY-10171)RIA KIT
P物质(S.P)为脑肠肽,分子量为1347,广泛分布于神经系统和胃肠系统,由APUD系统的EC1肠嗜铬细胞分泌。S.P具有多种生理功能,能够刺激和加速胃肠蠕动,刺激唾液和胰腺分泌,减少胆汁分泌,刺激生长抑素、胰岛素和高糖素的释放,同时,S.P还具有神经递质和调制因子的作用。本测定盒用于血浆提取液、组织提取液,脑脊液中S.P含量的测定。
盒组成及配制:冻干品于-20℃保存,溶解后允许冻融一次。液体试剂4℃保存。
1、缓冲液1瓶。
2、免疫沉淀剂(第二抗体)1瓶。
3、生理盐水(含0.5% BSA):自备。
4、抑肽酶1瓶 10%EDTA-Na2,自备。
5、标准品2瓶:1024pg/瓶,用前加缓冲液 1 ml/瓶溶解,然后倍比稀释成浓度
为1024、25 6、128、64、32、16、8pg/ml的标准。
6、S.P抗体 2瓶。
7、125I - S.P 2 瓶。
8、牛血清白蛋白0.5克。
P物质放免试剂盒操作说明书样品收集:
静脉血3ml ,注入含0.5M EDTA-Na2 30ul和抑肽酶1500 KIU试管中 混匀,
离心血浆放-20℃保存,测前提取或提取后再置-20℃贮存。
血浆提取:
每1ml血浆加2ml 冷丙酮(4℃±),混匀,4℃离心,2000转×20分钟。取
上清加4ml冷石油醚,混匀后再次离心。吸弃上相,下相用凉风(空调或电扇)将残
余丙酮吹掉后所余液体用冷冻抽干机抽干。亦可用氮气或多头吹干器吹干。干燥后密
封保存(4℃可存一周,-20℃可保存2—3月)提取管(瓶)不能用塑料管(瓶)!!!。
组织的提取:
取大小适宜的组织快,立即称重于煮沸的生理盐水(1ml)中煮沸3 分再加1N冰
醋酸0.5ml于匀浆器中匀浆提取,再用1N NaOH 0.5 ml中和,3000转/分,15分钟(最
好是低温离心)。取上清液贮存于-20℃以下待测,可保存2-3个月)。
注意事项:
本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液/瓶稀释
本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液/瓶稀释
本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
P物质放免试剂盒操作说明书 操作步骤:提取冻干的血浆样品加生理盐水(含0.5% BSA )0.5ml溶解。
S.P RIA加液程序 (单位:ul )
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试 剂 T NSB S0 S1 ~ S8 待测样本
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标 准 品 —— —— —— 100 ——
待测样本 —— —— —— —— 200
抗 体 —— —— 100 100 100
缓 冲 液 —— 300 200 100 ——
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充分混匀,4℃ 放置24小时
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125I- S.P 100 100 100 100 100
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摇匀4℃ 放置24小时
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分 离 剂 —— 500 500 500 500
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混匀,室温放置15分钟后,离心 3000转/分 15分钟,弃上清,测定各管沉淀cpm数。
结果计算:
1. 以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。以各标准管B/B0%与各标准管浓度的对数绘制曲线图,在图上查出各标本及回收管含量。
2. 血浆样本测值÷4=待测血浆样本的 S.P含量(pg/ml)(“4”为容积校正系数)
组织样本测值÷2=待测组织提取液S.P含量(pg/ml)。
3. 正常值:42.97±7.7 pg/ml。
本月药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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