β-内啡肽放免药盒操作说明书
β-EP(HY-10164) RIA KIT
β-内啡肽是一种由31个氨基酸组成的多肽,分子量为3465。它在垂体含量最高,在垂体外组织如下丘脑、胰脏、胃肠道、性腺、胎盘、淋巴细胞等都有分布。β-内啡肽具较强的样活性与镇痛作用,参与免疫功能和内分泌功能的调节,它可作为内源性神经安定剂,具抗精神分裂症的效应,它还与一些运动行为和学习记忆有关。临床上它用于镇痛,改善成瘾和治疗精神分裂症。β-EP在镇痛、免疫学、内分泌学研究中是一个有价值的指标。
药盒组成:
1、125I-β-EP(冻干品) 2 瓶。
2、β-EP抗体(冻干品)2 瓶。
3、标准β-EP(冻干品) 2瓶,3200Pg/ml,用缓冲液 1ml稀释,再稀释,
最后标准品共七瓶,浓度分别为3200、1600、800、400、200、100、50pg/ml。
4、分离剂(第二抗体)一瓶。
5、缓冲液1瓶。
6、1N 醋酸、0.1N盐酸、0.1N氢氧化钠,自备。
β-内啡肽放免药盒操作说明书实验步骤:
1、血清(或血浆)标本直接测定
2、取组织(米粒大小),立即称重后加到1ml 100℃生理盐水中煮沸5分钟后迅速冷却,再加0.5ml 1N醋酸制成匀浆,置4℃ 1-2小时后离心2000 G 15分钟,取上清,冷冻干燥后用RIA缓冲液复溶,进行RIA测定。或煮沸迅速冷却后用0.1N盐酸制成匀浆,置4℃1-2小时后再用0.1N NaOH中和,离心取上清液-20℃保存待测。
3、脑激液标本直接离心
4、测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
β-EP RIA 加样程序 单位:ul
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试 剂 T NSB S0 S1—S7 标 本
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缓 冲 液 —— 200 100 —— ——
EP 标 准 —— —— —— 100 ——
标 本 —— —— —— —— 100
125I-β-EP 100 100 100 100 100
抗 体 —— —— 100 100 100
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4℃ 放置24小时
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分 离 剂 500 500 500 500 500
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振荡3分钟,3000转/分 离心 15分钟,弃上清,测沉淀计数cpm。
结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,
在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。
β-内啡肽放免药盒操作说明书 注意事项:
本月标准品每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
本试剂盒主要技术指标:
1、 NSB:<5%。
2、灵敏度:<20 Pg/ml。
3、批内变异系数:CVw<5.50 %。
4、批间变异系数:CVw < 9.10% 。
5、正常参考值:129±55 Pg/ml 范围:50-180 Pg/ml。
(各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组)。
本月药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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