单核细胞趋化蛋白-1放免药盒说明书

单核细胞趋化蛋白-1放免药盒说明书

MCP-1（HY-106） RIA KIT

单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)又称单核细胞趋化和激活

因子（monoctye chemotactic and activating factor,MCAF)，属于C-C亚族（β亚族）成员。MCP-1/MCAF起初是从人髓样单核细胞系THP-1、神经胶质瘤细胞系以及LPS或PHA刺激的人PBMC培养上清中发现。目前已知，单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞、B细胞、平滑肌细胞等在PHA、LPS、Poly I-C、IL-1、IFN-γ、PDGF、EGF或某些病毒刺激下均可诱导分泌MCP-1。某些肿瘤细胞系则可组成性产MCP-1

试剂盒组成与配制：

1、MCP-1标准品7瓶，其浓度分别为15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000pg/ml。

2、¹²⁵I-MCP-1 1 瓶。10.5ml

3、MCP-1抗体 1 瓶，10.5ml。

4、分离剂(第二抗体)一瓶

单核细胞趋化蛋白-1放免药盒说明书标本的采集及保存

1. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

2. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

4. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

测定操作步骤：

MCP-1 RIA 操作程序 加样单位:ul

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试 剂 T NSB B₀ S₁-S₈ 标 本

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缓 冲液 —— 100 —— —— ——

零 标准 —— —— 100 —— ——

标 准 液 —— —— —— 100 ——

标 本 —— —— —— —— 100

抗 体 —— —— 100 100 100

¹²⁵I-MCP-1 100 100 100 100 100

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混匀，4℃ 放置24小时

————————————————————————————————————————————— 分 离 剂 500 500 500 500 500

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混匀，室温放置15分钟，3500转/分离心15分钟。弃上清，测沉淀计数(cpm)。

单核细胞趋化蛋白-1放免药盒说明书结果计算：

以N/T、B/T计算NSB、S₀结合百分率，以B/B₀计算标准及待测物结合百分率，

在半 对数座标纸上绘制标准曲线，并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。

注意事项：

1、本月标准品每瓶用 ml缓冲液稀释

2、本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释

3、本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释

药盒的技术指标：

1、灵敏度:≤ 3Pg/ml。

2、重复性:批内cv< 8％,批间cv<12％。

3、回收率:平均回收率 88％。

4、正常参考值：57.1±48.8 pg/ml

本月药盒参考数据：

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T NSB S₀ S₁ S₂ S₃ S₄ S₅

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CPM

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N/T% 2.1 B₀/T% 35 B/ B₀ % 94 82 65 38 19

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