NCI-H660 | NCI-H660细胞 | 人神经内分泌

细胞介绍

NCI-H660 是一种上皮神经内分泌细胞，是从一名 63 岁白人癌症男性患者的前列腺中分离出来的。该细胞系由 AF Gazdar 和 JD Minna 保藏，可用于癌症研究。虽然 NCI-H660 具有小细胞癌的外观和许多特性，但也存在差异。NCI-H660 表达升高水平的左旋多巴羧化酶和铃蟾肽样免疫反应性。这些细胞表达功能性心房钠尿肽 (ANP) 受体，但添加 ANP 不会对细胞的生长模式产生可检测到的变化。

细胞特性

1） 来源： 63 岁白人 男性 前列腺

2） 形态：圆形细胞 悬浮和部分贴壁细胞

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

一．培养基及培养冻存条件准备

1） 准备RPMI  1640 基础培养基   (iCell-0002)                  92%

优质胎牛血清                                （iCell-0500）                5%

GlutaMAX-1谷氨酰胺                    ( iCell-0900 )                  1%

P/S青霉素-链霉素                    （iCell-15140-122）            1%

ITS（胰岛素+转铁蛋白+硒）         (iCell-4507)                  1%

氢化可的松                                     （iCell-8450）                10nM

雌二醇                                                 (iCell-8140）                10nM 

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

该细胞为圆形细胞与一些附着细胞的漂浮聚集体，传代可以参考以下方法

1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。