糖尿病相关多肽免疫试剂盒说明书
IAPP(HY-10071) RIA KIT
糖尿病相关多肽(Diabetes Associate Polypeptide DAP)又名淀粉不溶素(Amylim)又称胰岛淀粉样多肽(Islet Asmyloid Polypeptide IAPP)由37个氨基酸的多肽,分子量为3901.85,IAPP和胰岛素关系密切,可修饰靶器官对胰岛素的反映,降低胰岛素周围组织中的敏感性,抑制糖的摄取和糖元合成,高浓度可抑制胰岛素分泌,当其在胰岛B细胞局部大量蓄积时,可损伤胰岛B细胞并拮抗胰岛素作用。
IAPP和II型糖尿病发病关系密切,在II型糖尿病发病过程中起非常重要作用,目前已成为国际上进行糖尿病临床研究和各种体内,体外试验中(如动物试验,胰腺组织培养、胰岛细胞移植等研究中)监测胰岛B细胞功能重要指标。IAPP与其它一些内分泌疾病的关系有待研究。
标本采集:
1、采血前加抗凝剂肝素15国际单位/ml(或10%EDTA.Na2 30uL)处理血样试管
2、采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml(含150 IU以上)血样,采血后立即置冰中,30分
钟内4℃下2000转/分,离心15分钟取血清置-20℃待测,可保存3-6个月。
糖尿病相关多肽免疫试剂盒说明书药盒组成:
1、IAPP抗体一瓶。 2、125I-IAPP一瓶。
3、IAPP标准品一瓶。 4、缓冲液一瓶。
5、分离剂(第二抗体)一瓶。
测定方法:
IAPP RIA 操作程序 (单位:ul)
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试 剂 T NSB S0 S1~S7 样 品
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缓 冲 液 —— 300 200 —— ——
标 准 品 —— —— —— 200 ——
样 品 —— —— —— —— 200
抗 体 —— —— 100 100 100
125I- IAPP 100 100 100 100 100
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摇匀,4℃ 48小时
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分 离 剂 —— 500 500 500 500
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混匀,室温放置20分钟,4℃3500转/分 离心15分钟,去上清,测定沉淀cpm值。
附:血浆标本过柱步骤:
1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A ),在4℃下3500转/分 离心20分钟,取上
清。
2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA,即为缓冲液B,将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C18 柱进行平
衡,接着用缓冲液A 3ml 冲洗。
3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C18柱中。
4、用缓冲液A 5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C18 柱。
5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C18,速度为1ml/3分钟,并收集上述淋洗液。
6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中,-42℃ 冷冻干燥 ,备用。
7、取干燥后的西林瓶用250 ul 0.05M PH 7.4 PB 进行溶解,并在振荡器上振荡3分钟。实
验时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。
Sep-Pak C-18: Waters.inc.
Massachusetts.USA
TFA:SIGMA .CO .USA 药盒不提供上述二种试剂(或材料)。
糖尿病相关多肽免疫试剂盒说明书正常参考值:
每个实验室都应根据本实验室条件及所接触人群做出自己的正常值
本月药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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