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- 2025年07月13日
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文献和实验DEAE-葡聚糖介导的转染，其原理还不清楚，可能是通过内吞噬作用而使DNA转导进入细胞核，此法只适合暂时转染实验，转染效率与DEAE-葡聚糖浓度以及细胞与DNA/DEAE-葡聚糖混合液接触时间的长短很有关系，可采用较高浓度的DEAE-葡聚糖(1g/L)作用较短时间(30分钟-1.5小时)，又可用较低浓度(250g/L)的DEAE-葡聚糖作用较长时间(8小时)。 方法如下： 1. 接种鼠L成纤维细胞浓度为5×105CO2 /孔/皿生长2～3天，当达50%板底面积可用。
1. 接种鼠L成纤维细胞浓度为5×105CO2 /孔/皿生长2～3天，当达50%板底面积可用。 2. 乙醇沉淀的4μg的PSV2-neo质粒 DNA，空气干燥后溶于40μL的TE中，或取供体DNA。 3. 用10ml 1×PBS 、4mL、10%富合生长因子血清的DMEM洗板(皿)。 4. 在80μl热的10g/L DEAE-葡聚糖中缓慢加入DNA，取120μL DNA/DEAE-葡聚糖加到每孔(皿)细胞中，使其分布均匀轻轻转动直到显示均匀
G-25 (Sephadex-G-25) 【 实验操作 】 1.实验凝胶的制备：商品凝胶是干燥的颗粒，使用时需经溶胀处理，称取4克葡聚糖凝胶G—25，加50毫升蒸馏水，搅拌均匀，在室温溶胀6小时，或沸水浴溶胀 2小时，一般采用后一种方法。再用倾泻法除去凝胶上层水及细小颗粒，用蒸馏水反复洗涤几次，再以缓冲溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗涤2—3次，使pH和离子强度达到平衡，最后抽去溶液及凝胶颗粒内部气泡，凝胶可保存在缓冲液内。 2.装柱
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