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文献和实验动物实验之前,必须对实验动物进行随机分组和编号标记,这是做好实验和实验记录的前提。 一、随机分组 (一)当分为二组时 例:设有雄性Wistar大鼠12只,按体重大小依次编为1,2,3,…,12号,试用完全随机的方法,分为甲、乙两组。 分组方法:假设所产生的点是随机数字表上第21行第31列的78,则从78开始,由上向下抄12个随机数字,如下: 动物编号:1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
素标记的dCTP会在反应延伸时连于引物末端;若是未被甲基化,则标记的dTTP参与反应。末端延伸产物经电泳分离和放射活性测定后可得出C/T值,即为甲基化与非甲基化的比值,从而分析得到待测片段中CpG位点甲基化情况[5][29](见图3)。同理也可以用dGTP或dATP。而且,若需研究一条链上不同位点CpG甲基化情况,可通过设计不同的引物在同一反应中完成[12]。 图3: 甲基化敏感性单核苷酸引物延伸(Ms-SnuPE)示意图。DNA经重亚硫酸盐处理后,以PCR扩增后得到产物作为Ms-SnuPE延伸的模板
、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH 甲液ml 乙液mI5.29 2.5 97.55.59 5.0 95.05.91 10.0 90.06.24 20.0 80.06.47 30.0 70.06.64 40.0 60.06.81 50.0 50.06.98 60.0 40.07.17 70.0 30.07.38 80.0 20.07.73 90.0 10.08.04 95.0 5.0你要配制pH=6.8的PBS,可用甲、乙液各50ml混合即可。
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