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文献和实验在园子里经常看到询问冻存、复苏细胞的方法和注意事项。故介绍一些致命的 “败笔”,和解决方法。 希望对大家有帮助。 ( 以 Raji 为例) 一、细胞冻存: 1. 错误的时机: 细胞状态不好(长的太过了,培养液已经很黄;细胞可疑污染;细胞已 经开始凋亡或崩解;连续培养超过二个月,细胞性状已有改变改变)。 解决: 最佳时机:细胞增殖旺盛,情况稳定,试验效果良好,复苏后两周内。 2. 细胞太少: 冻存时细胞浓度低于 1-5×1000,000/ml。(复苏很难成功)。 解决: 离心后调整细胞
室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及枸橼酸钠。生化实验一般建议用肝素抗凝。 ②样本保存:全血样本收集好后,若不能当天检测,4℃可保存1-2天。血清、血浆收集好后,若暂时不测定,可分装冻存备用,避免反复冻融,一般4℃可保存一周,-20℃可保存半个月,-80℃可保存一个月。特殊指标对样本有较高要求除外。 二、组织样本的收集和处理 1. 10%动物组织匀浆 取0.02-0.2 g新鲜动物组织块,用2-8°C的PBS(0.01 M,pH 7.4)漂洗,去除血液,滤纸拭干,称重,放入匀浆容器中,按照动物
Divide into two 15 ml c/f tubes--5 ml each. Invert for additional 5 min. Solution should be pink and will contain thread-like material. Spin at 4°C, 4000 rpm for 20 min to remove insoluble material. All spins done in fixed angle rotor
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