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- 2025年07月16日
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上海古朵生物科技有限公司
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51005-14-2
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文献和实验基于质谱的蛋白质鉴定，第6节：MALDI-TOF-MS蛋白和肽样品的制备
质胶样质谱鉴定过程中，多肽的回收是一个问题。如下图所示，将胶样中同样的20 ng兔骨骼肌肌动蛋白用不同的染色法进行染色：常规银染色（无戊二醛）与锌-咪唑锌阴性染色法。染色后，用胰蛋白酶在凝胶中对蛋白质进行消化，磁珠法对样品进行浓缩，用MALDI-MS进行蛋白质谱鉴定。结果发现，与阴性染色的蛋白质相比，蛋白质的银染色导致胰蛋白酶肽的回收率降低（比较图中左右两边肽的S / N比率）。该影响可通过去除蛋白质染色过程中银染试剂的方式消除。 图注：20 ng (500 fmol)兔骨骼肌肌动蛋白经胰酶
肌肉主要构成蛋白质之一。由374个氨基酸残基组成，分子量 41， 785，一般结合有 1分子的 ATP和 1原子的 Ca（分子量 42， 300）。兔骨骼肌肌动蛋白整个氨基酸的排列已经确定。直径为 5.5毫微米的球状单体（ G肌动蛋白）在中性盐条件下（ 0.1M KCl， 5mM MgCl2 等）聚合成为 F肌动蛋白。 F肌动蛋白具有双螺旋结构，每 36毫微米的半螺距（ Pitch）含有 13个分子的单体。 G肌动蛋白的 ATP聚合时脱去磷酸形成 ADP。在体内 F肌动蛋白构成 I带
一、摘要 目的：建立兔膀胱平滑肌细胞的分离、培养和鉴定的方法。方法：成年新西兰白兔两只（正常及梗阻各一只），采用酶法分离技术获得膀胱平滑肌细胞后于10%小牛血清的DMEM中培养，观察细胞形态和扩增情况，用爬片染色、电镜、蛋白质α-肌动蛋白（α-actin）鉴定细胞类型。结果：倒置显微镜下观察均呈“谷和峰”样结构、细胞爬片HE染色及电镜检查均证实为平滑肌细胞。免疫组化染色检测α-actin呈阳性反应。从细胞爬片HE染色和免疫组化染色检测α-actin呈阳性反应中我们发现该方法所的膀胱平滑
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