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文献和实验该如何保存 能不能利用Taq酶在双链DNA的3‘凹端末端引入一个单一的ddNTP 冷冻保存肝脏组织中DNA的提取 求助苯丙氨酸解氨酶引物设计 如何提取视网膜RNA 溶葡球菌酶(粉剂) 该如何配备 Takara的5’RACE实验测序结果怎么分析 做cdna 库用两对通用引物或一个通用一个特异,检测居然出现弥散条带 请教有关BD SMART Takara 5’RACE Kit 引物的设计 引物设计求助 引物设计求助 请教各位战友PCR过滤的问题
实验原理 1. TaqDNA聚合酶 在早期进行的PCR反应中,使用的是大肠杆菌DNA聚合酶1的大片段,即Klenow片段。也曾有人用噬菌体T4 DNA聚合酶。这两种酶的共同弱点是对热不稳定性,DNA合成反应只能在37°C进行。PCR时每一循环的解链温度都在90°C以上进行,故在每两个循环之间要加入新的DNA聚合酶,使得整过程整个实验过程很繁琐和昂贵。同时在37°C,引物与DNA模板之间会发生分子非特异性结合,最终导致很多非特异性DNA
1.PCR反应的最适条件1.1 TaqDNA聚合酶在早期进行的PCR反应中,使用的是大肠杆菌DNA聚合酶1的大片段,即Klenow片段。也曾有人用噬菌体T4 DNA聚合酶。这两种酶的共同弱点是对热不稳定性,DNA合成反应只能在37℃进行。PCR时每一循环的解链温度都在90C以上进行,故在每两个循环之间要加入新的DNA聚合酶,使得整过程整个实验过程很繁琐和昂贵。同时在370C,引物与DNA模板之间会发生分子非特异性结合,最终导致很多非特异性DNA片段的扩增。Taq 酶有耐高温的特性,其最适的活性
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