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Sulfo-SBED 生物素
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Sulfo-SBED Biotin Label Transfer Kit - Western Blot Application
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嵘崴达
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标记转移实验的典型方案:•将几微升溶解的 Sulfo-SBED 试剂加入 0.5-1 mL 纯化诱饵蛋白的 PBS 溶液中。•在冰上或室温下于暗处孵育混合物 30-120 分钟。•进行脱盐或透析(在弱光下)以从标记诱饵蛋白中去除过量未反应的 Sulfo-SBED。•将标记诱饵蛋白添加至细胞裂解物或其他包含假定靶蛋白相互作用体(“猎物”)的溶液中。•当形成相互作用复合物时,将溶液暴露在紫外光 (365 nm) 下几分钟。•通过以下几种方法之一分析产品:•Western 印迹:裂解DTT 中的交联,通过 SDS-PAGE 分离蛋白,并通过 Western 印迹法使用辣根过氧化物酶标记的链霉素亲和素检测生物素化条带。•纯化和质谱或测序:胰蛋白酶酶切后对生物素化蛋白或肽片段进行亲和纯化,并进行 MS 或测序以表征所涉及的蛋白。
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