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文献和实验; 2)出汁率:300~400 mL/kg; 3)推荐榨汁机:手摇式碾磨榨汁机; 4)果实质量参考:70 g 左右果实(不包括果皮),榨汁处理后得到 20~30 mL 原汁,按推荐试剂盒进行前处理后,浓缩 50 倍,最终可获得 400 μL 左右的植物囊泡。 5)处理: ① 薄皮果实洗净后,将果实切小块直接榨汁; ② 厚皮果实(如柠檬)的果皮出汁量较低且含有大量杂质,需要去皮后切小块再榨汁。 6)提取试剂盒推荐:宇玫博 UR5220 植物囊泡提取纯化试剂盒(多汁植物)。 2. 花/叶:如玫瑰、芦荟
中含有丰富的收缩蛋白和结缔组织,以及干扰 RNA 分离的胶原蛋白。 解决方案 1. 对于含有丰富的收缩蛋白和结缔组织,组织细胞密度低,其中 RNA 含量较少,可以适当增加材料的起始用量。 2. 务必要在低温冷冻条件下将组织彻底磨碎,并尽量尽快研磨成粉末状。 3. 用蛋白酶或含有苯酚的试剂处理样本。 内源性 RNase 含量高的组织如肾脏、肠、脾脏、胸腺以及胰腺 该类样本中 RNase 含量很高,提取过程中很容易发生 RNA 的降解。 解决方案 1. 尽量使用新鲜组织,采样不宜太大,尽可能缩短
、关键试剂操作条件 1. DAB 显色反应大约需要30s-5 min,要控制好反应时间,勿使背景颜色过深。具体的可能还是得根据切片组织来源和切片厚度、试剂盒说明摸索条件。 2. 蛋白酶K工作液处理时间、温度须在范围内摸索,温度过高,时间过长,易造成脱片且可能破坏核酸结构,出现假阳性。 3. 阳性样本的DNase 1处理一般建议室温,10 min 即可。 五、如何减弱非特异性染色 肝脏或肾脏,因富含内源性过氧化物酶,需要增加过氧化氢浓度和延长孵育时间。其他还可以加强灭活、缩短 DAB 孵育
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