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- 文献和实验
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大量
- 供应商:
杰美基因
- 规格:
20次
供应试剂主要类别:细胞技术、分子技术、蛋白化学、免疫抗体、医学技术、生物化学、模式生物、微生物、植物、载体、毒理、营养、平台等等相关技术的各种大量试剂。
其中蛋白化学技术相关试剂类别如下:
蛋白制备试剂专题
蛋白定量试剂专题
蛋白处理试剂专题
核酸-蛋白结合凝胶电泳定量分析(McKay)试剂专题
核酸-蛋白结合凝胶迁移电泳分析(EMSA)试剂专题
核酸-蛋白结合足迹法(FOOTPRINTING)分析试剂专题
核酸-蛋白结合免疫沉淀分析(CHIP)试剂专题
蛋白-蛋白结合分析试剂专题
融合蛋白处理试剂专题
蛋白/抗体标记试剂专题
蛋白电泳试剂专题
蛋白电泳染色试剂专题
蛋白杂交试剂专题
糖蛋白试剂专题
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文献和实验。大家目前最常用的方法是利用溶液法进行蛋白提取(如 RIPA 裂解液),但是往往会在蛋白质提取中产生两个不同的组分,即 RIPA 可溶性和 RIPA 不可溶性组分。通常 RIPA 不可溶性组分被我们直接丢弃忽略。但是已经有文章证实许多蛋白质存在于被丢弃的 RIPA 不可溶性组分中[1,2] 。也就是说利用溶液法提取的并非是完整的总蛋白,而仅仅是一些可溶性蛋白。那使用 RIPA 等溶液法提取的不完整总蛋白做实验,到底会不会影响我们磷酸化蛋白检测和定量研究呢?我们来一起讨论下。Brady 等人中
聚集在 RIPA 不可溶组分中,不可溶性组分中 P53 和 caspase 9 信号甚至比可溶性组分中更强,表明目标蛋白在 RIPA 不可溶组分中显著丢失。证明 RIPA 并不能提取到真正意义上的总蛋白,丢掉的不可溶组分中还有很多蛋白,甚至是目标蛋白。例四 .SU YEON LEE,et al(2010).Implication of necrosis-linked p53 aggregation in acquired apoptotic resistance to 5-FU in MCF
,不同的裂解液配方溶解效率不同,通常使用的 NP-40、RIPA 等裂解液无法将所有蛋白全部溶出(如图 2),已经有研究发现细胞骨架、细胞外基质蛋白及部分膜蛋白、核蛋白等属于难溶蛋白,在提取过程中会形成不可溶沉淀[3]。如果目的蛋白属于这类难溶蛋白,仅使用可溶性组分(上清)用于 WB 实验时,目的蛋白将无法被检测到。针对这种情况,我们可以选择更加有效的裂解液配方,或者使用柱式蛋白提取法来增溶目的蛋白。例如,使用柱式法总蛋白提取法,可有效溶解难溶蛋白,避免不可溶组分的产生,有效解决蛋白丢失问题
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