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文献和实验solution 3. Incubate with secondary antibody diluted in Blocking buffer for 60 min at room temp. 4. 3 x10min secondary washing solution 1 x10min alkaline phosphatese buffer 5. Detect with Chromogenic I. Stripping blot 1. Rinse blot off with 0.05
. Lysis buffer (store on the benchtop without proteinase K). 60 g/ml proteinase K 10mM Tris-Cl, pH 8.2 50mM KCl 2.5mM MgCl2 0.45% Tween-20 0.05% gelatin Master mix . Prepare a master mix containing the following
【原创】暗室实验（化学发光底物检测方法）及Western Blot实验优化方法
%的Tween-20 封闭液封闭膜上的非特异性点，室温震荡孵育1 h。 5. 将一抗稀释到封闭液/Tween-20 去污剂中，并加到膜上，室温震荡孵育1h。 6. 用TBS 或PBS 洗膜4-6 次，用尽可能大体积的洗脱液，在洗脱液中加入0.05%的吐温，用以减少非特异背景。每次洗脱过程中，使膜悬浮在洗脱液中震荡大约5 分钟，倒出洗脱液并重复。孵育前，在洗脱液中短时间的漂洗可能会增加洗脱效率。 7. 制备二抗/HRP 结合的封闭试剂/Tween-20 去垢剂稀释液，将二抗稀释液加到膜上震荡孵育1 h
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