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文献和实验cDNA synthesis using superscript II
SuperScript II 1 µl water 4 µl Prepare this mix as a master mix and add then 20 µl to each reaction. Synthesize the cDNA in a thermocycler: 1.
3和4）。使用oligo(dT)引物和SuperScriptⅡ逆转录酶合成cDNA。扩增对象为DNA聚合酶εmRNA 5'端377bp片段和复制酶A mRNA的643bp片段，两者都为中等丰度。将1/10的cDNA合成反应产物使用Taq DNA聚合酶扩增30个循环。 为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏）中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的RNA，在水中保存3年仍保持
，从而节省了花费在筛选大量PCR产物上的时间。图一 示意GeneRacer™的工作原理。RNA样品经CIP和TAP处理，保证GeneRacer™寡聚RNA仅同全长转录本连接。然后使用SuperScriptⅡ逆转录酶对这些转录本逆转录，得到的cDNA做为PCR的模板。GeneRacer™寡聚RNA序列做为GeneRacer™ 5’引物结合位点，这样，只有具有全长5’末端的cDNA才会被扩增。使用GeneRacer™步骤及高保真度Platinum® Taq DNA聚合酶，就可以确保得到最高效的实验结果。敏感
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