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200g
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文献和实验1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒;2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀,再等量加入10%PEG(一般使用的是PEG6000就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话,可以建议使用Millpore公司的离心浓缩柱,Amicon系列的可以一次浓缩15ml样品。);3、4℃过夜或放置一段时间;4、8000/min离心30分钟,收集病毒沉淀;5、将病毒沉淀加入适量的pbs中,4℃过夜;6、10000r/min离心1小时,沉淀即为浓缩的病毒。还可以用梯度
Large Scale Plasmid Preps: PEG method
1. Grow 250 500 mL of bacteria overnight in LB with 50 µg/mL of ampicillin. 2. Transfer culture to Nalgene bottles. Spin in SGA rotor at 6000 rpm, at 4°C for 10 min. 3. Discard supernatant. Keep everything on ice. Resuspend
聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)是一种无电荷的直链大分子多糖,可非特异性地引起蛋白质沉淀。沉淀具有可逆性,被沉淀的蛋白质生物活性亦不受影响。不同浓度的PEG可沉淀分子量不同的蛋白质,在pH值、离子浓度等条件固定时,蛋白质分子量越大,用以沉淀的PEG浓度越小。由于PEG6000对蛋白质沉淀具有良好的选择性,所以在IC测定中主要采用PEG6000。PEG使IC沉淀的机理可能在于使其自液相中空间排斥而析出,此外,PEG还可抑制CIC解离,促进CIC进一步聚合成更大的凝聚物
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