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文献和实验Plasmid DNA Isolation (Sheared Lysate Method)
The cleared lysate method (see Chapter 25 ) is not usually very effective for isolation of plasmids larger than about 20 kb. Recovery of plasmid DNA is often poor, presumably because high molecular weight plasmids are removed by the clearing
（1）在50ml灭菌聚乙烯管中加入1g鲑精DNA，加入15ml DEPC水使其浸泡5min至2h； （2）加入2.5ml 2mol/L HCl，室温放置，DNA形成白色沉淀，充分振摇至沉淀物相互缠绕在一起，用吸头尖端使之形成一球团状（2～3min）； （3）加入5.0ml 2mol/L的NaOH。摇动小管使DNA悬浮、溶解，将小管置50℃15min助溶； （4）用DEPC水将混合物稀释至175ml（总体积），充分混合，注意确保管内已无颗粒状； （5）加入
needle and shear DNA by squirting through needle into fresh 50 ml conicals at 15 ml/conical. To this add 0.9 ml/conical of 5 N NaCl.3) Boil in water bath (95 - 100℃) for 20 min. Cool in ice water. Vortex and then add 1 drop (from a standard transfer pipet
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