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2年
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北诺
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1000
- 供应商:
北诺
BL21 Plyss(DE3)
BL21Condon Plus (DE3)
TB1(DE3)
C41(DE3)
C43(DE4)
Rosetta(DE3)
Origami B (DE3)
Rosetta-gami-B(DE3)
Rosetta-gami(DE3)Plyss
DH5α
Top10
Top10F'
JM109(DE3)
TG1
Xl1-Blue
X10-Gold
HB101
DH10Bac
STBL3菌
BJ5183细菌
PGEX4T-1
PGEX4T-2
PGEX4T-3
PGEX-6P-1
PGEX-KG(不完整)
PET3b
PET5b
PET11a
PET15b
PET20b
PET21b
PET22b
PET24a
PET25b
PET26b
PET27b
PET28a
PET28b
PET30a
PET31a
PET32a
PET35
PET41a
PET43.1
PET50b
PET52b
PET302
PET303
PET-Dsba
PET-GST
PET-His
PET-Trx
PDsred2-ER
PET32a-DsRed2
PET41a-DsRed2
PGEX4T-1-DsRed2
pEGFP-N1
PLPP-STII
PLLP-OmpA
PTrc-CKS
Pmal-c2x
Pmal-p5x
PMBP-C
PMBP-P
PUC19
PET28a-sumo
PET-duet
pACYCDuet-1
pRSFDUET-1
pproexhta
pproexhtB
PcoldI
PcoldI-sumo
PBV220
求交换各种人源基因
PEGFP-N1
PGL-4.15
PRL-TK
PRL-SV40
PCDNA3.1+/(-)
大肠菌株DH5α
大肠菌株JM109
大肠菌株DH10B
大肠菌株BL21(DE3)
pBV220
pET26b
pET30a
pET5b
Rosetta-gami-B(DE3)
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文献和实验本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选,宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉(lacZΔΜ15)。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白,可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株,如BL21(DE3)。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时(>7-8 kb),经转化
相关,不同的载体是不一样的。一个载体可只看它的启动子到终止子那一段,其它的可以考虑少些。 pET 表达菌株的相关信息 ( DE3 )指宿主为 λ DE3 溶原菌,其染色体上带有一拷贝由 lacUV5 启动子控制的 T7 RNA 聚合酶基因。这类菌株适用于从克隆到 pET 载体的目标基因生产蛋白。命名为 pLysS 和 pLysE 的宿主菌带有编码 T7 溶菌酶(为 T7 RNA 聚合酶的天然抑制物)的 pET 相容性质粒。带有 pLysS 的细胞
。 1.准备工作(试剂配置和器材准备) 1)操作流程示意图 主要步骤操作 ①制备pET-32a(+)载体 用限制性酶消化,去磷酸化后胶纯化回收 ②制备插入DNA PCR装入质粒后进行限制性消化,再回收 ③插入片段克隆到pET-32a(+)载体 插入片段与pET连接,转化 ④转化表达宿主菌BL21 转化带有T7RNA聚合酶基因的菌株 ⑤诱导表达目的蛋白 SDS-PAGE,Western 印迹、定量分析确定目的蛋白 ⑥放大试验纯化目的
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