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- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃环境避光中保存
- 保质期：
十二个月
- 英文名：
PAGE非变性蛋白上样缓冲液
- 库存：
500
- 供应商：
青岛捷世康生物科技有限公司
- CAS号：
0
- 规格：
5ml/瓶
产品简介：
[产品名称]：PAGE非变性蛋白上样缓冲液|说明书
[英文名称]：
[类别]：蛋白电泳
产地]：山东青岛,进口原装
[用途]：本品只能用于科研实验,严禁用于临床。
[规格/型号]：5ml/瓶。
[有效期]：十二个月
[产品浓度]：5×
[贮存环境]：-20℃环境避光中保存。
[使用范围]：常规的非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)蛋白样品的上样。
[PAGE非变性蛋白上样缓冲液|说明书试剂组成]：含少量DTT,有轻微刺激性气味,但不的巯基乙醇,其余成分还Tris-HCl缓冲液等。
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文献和实验将目的蛋白从固相介质上洗脱下来，依据捕获方式和下游应用优化配方 如果诱饵蛋白或者靶蛋白带有标签，可用高浓度标签或配体进行竞争洗脱 温和的配方：0.1M 甘氨酸（pH2.5-3） 也可使用 SDS-PAGE 上样缓冲液直接洗脱 资源合集中有建议的对应不同洗脱环境的配方。 常见问题 1、Co-IP 背景较深或者条带杂乱 固相基质的非特异性结合— 抗体结合非特异的蛋白 洗涤不当造成杂带 建议方案：pre clear 或者更换磁珠；设置对照排除非特异性条带；优化缓冲液（学习视频中会有详细讲解
或 4℃过夜以捕获免疫沉淀复合物。 离心（3000 rpm，5 min）收集 Agarose 珠子，弃掉上清，用 800 µL-1000µL 预冷的 PBS 缓冲液洗涤珠子 3 次。（小心吸取上清，避免触碰底部珠子） 收集沉淀，加 60 µL 2×SDS 蛋白上样缓冲液中重悬沉淀，轻混均匀后煮沸 5 min，12000 rpm 离心 10 min。 将上清转移至一新离心管，进行 Western 检测。
某些抗体识别的表位是非连续氨基酸构成的蛋白三维结构，此种情况则需要进行非变性的WB，抗体的说明书一般会标注，这种非变性电泳不加SDS，样本也不需煮沸。某些抗体仅识别蛋白的非还原态，如某些cysteine基的氧化态，因此loading buffer和电泳液中不加入β-mercaptoethanol and DTT。 7. 电泳 7.1 PAGE胶的制备 不同分子量的蛋白选择不同的凝胶浓度（参考下表），原则上高分子量蛋白用低浓度胶，低分子量蛋白用高浓度
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