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绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸,维生素的范围亦很广,另外常规含有无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸)。MEM/F12 这两种培养基各取1/2,形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM,现应用于快速生长的细胞,同MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。选择某种培养基,应仔细了解成分表,应知道大多数情形下培养基都有不足。例如,有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸,而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域,但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言,则并非最佳选择,特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁,据报道也有神经毒效应。
宋内志贺氏菌 制备方法:
1. 培养同源细胞(未克隆前时的同一细胞)至半汇合状态时,更换一次培养液,再继续培养24~48小时后,吸出所有培养液。
2. 离心:3000~4000/分离心10分钟,吸取上清液。
3. 滤过:再经直径0.22μm滤孔的滤膜过滤,低温冻存贮备用;用时取1分适应培养基+2培养基混合使用。
生长因子绝大多数哺乳类胚胎神经元有严格的营养要求,若不能提供适宜的生长因子或合适的因子组分,将会使绝大多数神经元在体外培养的数天中死亡。解决这一问题有两条思路,一是让培养细胞提供自己的营养因子,二是在宋内志贺氏菌 中加入纯的生长因子。如果细胞混合物能在高密度时生长,所需的生长因子便会积累到可观的数值,尤其当培养基很少变化时。若某种细胞混合物生长时有很少的营养需求,可保持培养基在一段时间里不作任何变动,以使营养(生长)因子积累,而最后促使所需要的细胞类型能够生长。但是,这种对营养(生长)因子自身倚赖性亦有弊端,因为通常在混合细胞群体中细胞很难有同比例增殖,某些细胞会因生长条件的贫乏而受限制。另外,这种方法只能进行相当高密度的细胞培养。因为培养基的条件在细胞的较低密度时变的不够有效。不过某些时候纯化神经元群体的低密度培养可用条件培养基(经过了高密度培养)进行,或在胶质上生长的神经元所用过的培养基来支持。
满足神经元营养需求的第二条途径是向培养基中加入生长因子。通常用于组培的通用适宜因子是神经生长因子NGF。不过,只有少数对这种蛋白质有反应的细胞类型的细胞才能生长。
宋内志贺氏菌 注意事项
1 用L-多聚赖氨酸(0.1mg/ml) 包被培养板后,要待其干后才能接种,因为其对神经元有毒性。L-多聚赖氨酸(0.1mg/ml)能回收再利用。
2 取脑组织时动作尽量要快,并且尽量低温操作。
3 分离皮层和海马时,要尽量分离脑膜和血管,否则有大量的成纤维细胞。
4 用吸管轻轻吹打细胞时,尽量不起泡沫,以免损伤神经元。
5 接种细胞的过程,动作要快,以免细胞聚集。
6 接种细胞后,24h勿移动,以免影响细胞贴壁。
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文献和实验B、分解甘露醇组:包括福氏、鲍氏、宋内氏菌。再按乳糖分解情况,分为迟缓分解乳糖的宋内氏和不分解乳糖的福氏和鲍氏菌。后者进一步再根据靛基质产生与否,分靛基质阳性(福氏菌1、2、3、4、5型和鲍氏菌5、7、9、11、13、15型)和靛基质阴性(福氏菌6型和鲍氏菌1、2、3、4、6、8、10、12、14)二类(见表一) 抗原构造与分型:志贺氏菌属细菌的抗原
志贺氏菌属( shigella )是一类革兰氏阴性杆菌,是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌,通称痢疾杆菌。大小为 0.5 ~ 0.7 × 2 ~ 3 μ m ,无芽胞,无荚膜,无鞭毛。多数有菌毛。革兰氏阴性杆菌。兼性厌氧菌,能在普通培养基上生长,形成中等大小,半透明的光滑型菌落。在肠道杆菌选择性培养基上形成无色菌落。分解葡萄糖,产酸不产气。 vp 试验阴性,不分解尿素,不形成硫化氢,不能利用枸橼酸盐作为碳源。宋内氏志贺氏菌能迟缓发酵乳糖( 37 ℃ 3 ~
凡是三糖铁反应符合志贺氏菌属特征者(斜面产碱或不变色,底层产酸,H2S(—),产气(—),但福氏6型产生少量气体)、无动力、革兰氏阴性杆菌、作V-P试验,苯丙氨酸,赖氨酸,柠檬酸盐,葡萄糖铵试验。其结果全部阴性者,作血清学试验。 3. 血清学试验 挑取三糖铁斜面上的培养物,按下列顺序作玻片凝集试验: 四种志贺氏——→福氏————→宋内氏————→志贺氏————→志贺氏
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