KC 培养基

基础KC 培养基
绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
KC 培养基 制备方法：
1. 培养同源细胞（未克隆前时的同一细胞）至半汇合状态时，更换一次培养液，再继续培养24~48小时后，吸出所有培养液。
2. 离心：3000~4000/分离心10分钟，吸取上清液。
3. 滤过：再经直径0.22μm滤孔的滤膜过滤，低温冻存贮备用；用时取1分适应培养基+2培养基混合使用。
生长因子绝大多数哺乳类胚胎神经元有严格的营养要求，若不能提供适宜的生长因子或合适的因子组分，将会使绝大多数神经元在体外培养的数天中死亡。解决这一问题有两条思路，一是让培养细胞提供自己的营养因子，二是在KC 培养基 中加入纯的生长因子。如果细胞混合物能在高密度时生长，所需的生长因子便会积累到可观的数值，尤其当培养基很少变化时。若某种细胞混合物生长时有很少的营养需求，可保持培养基在一段时间里不作任何变动，以使营养（生长）因子积累，而最后促使所需要的细胞类型能够生长。但是，这种对营养（生长）因子自身倚赖性亦有弊端，因为通常在混合细胞群体中细胞很难有同比例增殖，某些细胞会因生长条件的贫乏而受限制。另外，这种方法只能进行相当高密度的细胞培养。因为培养基的条件在细胞的较低密度时变的不够有效。不过某些时候纯化神经元群体的低密度培养可用条件培养基（经过了高密度培养）进行，或在胶质上生长的神经元所用过的培养基来支持。
满足神经元营养需求的第二条途径是向培养基中加入生长因子。通常用于组培的通用适宜因子是神经生长因子NGF。不过，只有少数对这种蛋白质有反应的细胞类型的细胞才能生长。
KC 培养基 注意事项
1 用L-多聚赖氨酸（0.1mg/ml） 包被培养板后，要待其干后才能接种，因为其对神经元有毒性。L-多聚赖氨酸（0.1mg/ml）能回收再利用。
2 取脑组织时动作尽量要快，并且尽量低温操作。
3 分离皮层和海马时，要尽量分离脑膜和血管，否则有大量的成纤维细胞。
4 用吸管轻轻吹打细胞时，尽量不起泡沫，以免损伤神经元。
5 接种细胞的过程，动作要快，以免细胞聚集。
6 接种细胞后，24h勿移动，以免影响细胞贴壁。
KC 培养基 相关产品如下：
hz1001 平板计数琼脂（PCA） 250g 用于细菌总数的测定，该培养基含糖
Plate Count ?Agar
hz1002 营养琼脂 (NA) 250g 营养琼脂是 APHA 、 GB 标准、 SN 标准和国家药典推荐的培养基，用于食品、奶制品及水中细菌总数的
Nutrient? Agar
hz1003 营养肉汤 (NB) 250g 用于一般营养不苛求细菌的培养（SN，GB标准）
Nutrient? Broth
hz1004 TTC营养琼脂 250g 用于细菌总数测定
TTC Nutrient? Agar
hz1005 锰盐营养琼脂 250g 用于嗜热需氧芽孢杆菌的检验
Manganese Nutrient Agar
hz1006 血琼脂基础 250g 用于营养要求较高的细菌培养及溶血试验
Blood Agar Base
hz1007 胰化大豆琼脂 250g 用于细菌总数测定
Nutrient? Agar
hz1008 LB琼脂 250g 用于细菌培养
LB Nutrient Agar
hz1009 LB肉汤 250g 用于细菌培养
LB Broth
hz1010 营养肉汤 (不含糖) 250g 用于一般营养不苛求细菌的培养
（Dextrose-Free）Nutrient? Broth
hz1011 溴甲酚紫葡萄糖肉汤 250g 用于低酸性罐头食品商业无菌检验
Bromcresol Purple Dextrose Brofh
hz1012 溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基 250g 用于压力蒸汽灭菌效果测定
BCP Dextrose Peptone Brofh
hz1013 0.5%葡萄糖肉汤培养基 250g 用于生物监测评价
0.5%Dextrose Brofh
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Tryptic Soy Agar
hz1015 胰蛋白胨大豆肉汤（TSB） 250g 用于医药行业的卫生监测培养
Tryptic Soy Broth
hz1016 0.1%蛋白胨水 250g 用于样品稀释
0.1%Peptone W
hz1017 液体硫乙醇酸盐培养基（FT） 250g 用于需氧菌厌氧菌和微需氧细菌的培养
Fluid Thioglycollate Medium
hz1018 SCDLP液体培养基 250g 用于化妆行业的卫生检测
Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Broth
hz1019 酸性肉汤培养基 250g 用于酸性罐头食品商业无菌检验
Acid Broth Medium
hz1020 脑心浸出液肉汤 250g 用于营养要求较高的微生物的培养
Brain Heaet Infusion Broth
hz1021 哥伦比亚琼脂 250g 用于营养要求较高的微生物的培养及溶血试验
Columbia Agar Base
hz1022 麦芽浸膏汤 250g 用于霉菌和酵母菌的培养