mMESSAGE mMACHINE ® Kit for T7

mMESSAGE mMACHINE Kits for T7 SP6 T3
加帽的转录产物更稳定也更容易结合核糖体以翻译表达人工合成的mRNA。所有的中都提供反义加帽模拟物（ARCA）以确保加帽梦正常进行。mMSSAGE mMACHINE T7 ULTRA kit除了加帽还包括ployA加尾的试剂用于体外RNA转录，更进一步提高产物稳定性。

mMESSAGE mMACHINE ^® Kit for T7 SP6 T3

— — High Yield Capped RNA Transcription Kit
原 理：
mMESSAGE mMACHINE ^® high yield capped RNA转录试剂盒是Ambion公司的专利技术，专门设计用于体外高产量合成帽状RNA（即合成RNA的5端带帽状结构），帽状RNA模拟了大多数真核生物体内发现的mRNA结构。试剂盒内的帽状类似物[m7G(5)ppp(5)G]与4种核苷酸混合在单一溶液内，简化了反应步骤。另外帽状类似物：GTP经优化设计为1:4，最大化转录生成RNA和帽状RNA所占比例。20ul的反应体系加入1µg DNA模板在2h内可以体外合成15-35 µg 7-甲基鸟苷帽状RNA，其产量是传统体外转录反应的10-50倍。
优 势：
1）一步法直接合成带帽状结构的RNA，其结构与大多数真核生物体内的mRNA结构相同；
2）试剂盒内酶混合液含RNase抑制剂，保护RNA不被降解；
3）试剂盒含对照模板（Xenopus elongation factor 1a, pTRI Xef），以检测试剂盒的转录效率；
应 用：
帽状RNA可直接用于下游实验：显微注射入卵母细胞，体外翻译，转染或者其他。
试剂盒成分：（ 25 reactions ）
1.75 ml， Nuclease-free Water。
50 μL Enzyme Mix (SP6, T7, or T3)，50%甘油缓冲液含RNA聚合酶、Rnase抑制剂和其他。
50 μL，10X Reaction Buffer (SP6, T7, or T3) ，含盐类、缓冲液、DTT和其他成分。
250μL，2X NTP/CAP (SP6, T7, or T3)，一种中性缓冲液含有ATP/CTP/UTP/GTP/帽状类似物。
100μL GTP，20 mM in SP6 Kits; 30 mM in T3 and T7 Kits。
100 μL，TURBO DNase (2 U/μL)。
10 μL，pTRI-Xef, 0.5 mg/mL (Control Template)。
1 ml，Ammonium Acetate Stop Solution。
1.4 mL，Lithium Chloride Precipitation Solution。
1.4 mL，Gel Loading Buffer II。
实验材料（自行准备）：
DNA模板：待转录的DNA序列上游必须带有正确的RNA聚合酶启动位点（T7，T3或SP6）；
标记核苷酸(选择性)：[α- ³² P] UTP or [α- ³² P]CTP可加入反应体系用作追踪元素，方便定量检测RNA合成量；
合成RNA纯化试剂（选择性）：缓冲液或饱和酚/氯仿，异丙醇，离心柱；
DNA 模板（注意事项）：
（1）试剂盒选择：根据带转录的DNA序列上游带有的RNA聚合酶启动位点（T7，T3或SP6）选择对应的试剂盒；
（2）模板浓度：推荐使用0.5 μg/μL水溶液或TE溶液；
（3）模板大小：最佳长度是0.3-5.0kb，可用于更长或更短的模板，需适当调整反应条件；
（4）模板方向：若合成sense RNA(正义RNA)，使用RNA聚合酶对应的细菌启动子在5端或者蛋白质编码区的N末端；如果模板含有质粒，经多克隆位点内切酶线性化后启动子处于相反位置；若合成antisense RNA（反义RNA），使用RNA聚合酶对应的细菌启动子在3或者蛋白质编码区的C末端；
产品信息：

product name	part number	quantity	price （ RMB ）	storage
mMESSAGE mMACHINE® SP6 Kit	AM1340	25 rxn	询价	–20°C
mMESSAGE mMACHINE® T7 Kit	AM1344	25 rxn	询价	–20°C
mMESSAGE mMACHINE® T3 Kit	AM1348	25 rxn	询价	–20°C

参考文献：
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