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转基因小鼠筛选——鼠尾提取基因组DNA方法
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惠森生物科技(上海)有限公司
1. 小鼠分笼后打耳标,剪取小鼠尾尖3mm--5mm左右于1.5mL 离心管中,标记耳标号
2. 配置消化液(SSTE),每管加入消化液0.5mL,蛋白酶K 1~5 μL, 55℃,3-5h,或放置过夜。(最长可放置3天)
3. 加1倍体积(0.5mL)PCI(下层液体),上下颠倒10余次。(PCI可分装出一些现用,以免操作不慎污染)
4. 室温15000rpm离心,10min
5. 取上清约0.4mL入新管,依次标号,加入异丙醇0.4mL ,4℃,15000rpm离心,5min
6. 弃上清,滤纸吸干,加入70%乙醇0.5mL,将管底沉淀弹起,上下颠倒几次,洗涤
7. 4℃,15000rpm离心,5--7min
8. 弃上清,瞬时离心,用枪吸干剩余液体,后经空气干燥5-10min
9. 加入1*TE 60-170μL一般加100μL,振荡30min溶解,于4℃冰箱保存
2. 配置消化液(SSTE),每管加入消化液0.5mL,蛋白酶K 1~5 μL, 55℃,3-5h,或放置过夜。(最长可放置3天)
3. 加1倍体积(0.5mL)PCI(下层液体),上下颠倒10余次。(PCI可分装出一些现用,以免操作不慎污染)
4. 室温15000rpm离心,10min
5. 取上清约0.4mL入新管,依次标号,加入异丙醇0.4mL ,4℃,15000rpm离心,5min
6. 弃上清,滤纸吸干,加入70%乙醇0.5mL,将管底沉淀弹起,上下颠倒几次,洗涤
7. 4℃,15000rpm离心,5--7min
8. 弃上清,瞬时离心,用枪吸干剩余液体,后经空气干燥5-10min
9. 加入1*TE 60-170μL一般加100μL,振荡30min溶解,于4℃冰箱保存
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