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DMEM high glucose medium
DMEM高糖培养基 (含L谷氨酰胺,不含丙酮酸钠,不含酚红,含HEPES)培养条件:
完全培养基:DMEM高糖培养基90%;胎牛血清10%。
培养条件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
DMEM高糖培养基 (含L谷氨酰胺,不含丙酮酸钠,不含酚红,含HEPES)制备:
1. 分离和培养宿主细胞;
2. 通过病毒介导或者其它的方式将多能性相关的基因导入宿主细胞;
3. 将病毒感染后的细胞种植于饲养层细胞上,并在ES细胞专用培养体系中培养,同时在培养期间根据需要加入相应的小分子物质以促其重编程;
4. 出现ES样克隆后进行IPS细胞的鉴定(细胞形态、特定基因的表达、表观遗传修饰、体外分化潜能等方面)。
细胞生长:贴壁生长
细胞形态:上皮样;多角形
细胞传代:1:2-1:4传代;每周2-3次
DMEM高糖培养基 (含L谷氨酰胺,不含丙酮酸钠,不含酚红,含HEPES)传代方法:
收到细胞后,取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
一.如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。
二.如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤如下:
1. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml完全培养基,吸出,分到新的培养瓶中。1:3~1:6传代;2~3天1次
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文献和实验细胞培养基成分复杂,包括盐类、糖类、维生素、氨基酸、代谢前体、生长因子、激素和微量元素。对这些物质的需求因细胞而有差异,这也导致大量的不同培养基配方出现。主要碳源物质通常是葡萄糖,有时也会使用半乳糖代替,这是因为半乳糖的代谢速度较慢。氨基酸(尤其是 L - 谷氨酰胺)和丙酮酸盐也可作为碳源。除了营养成分,培养基也会帮助维持培养体系的 pH 和渗透压。pH 的维持依靠一种或多种缓冲液体系,最常见的包括 CO2/NaHCO3、磷酸盐和 HEPES 等,血清也可以作为完全培养基的缓冲液(文章末尾会送
母种培养基的配制 同一种菌类培养基的配方虽然有多种多样,但必须含有各种菌丝生长所需要的养分、水分和适宜的酸碱度。马铃薯、葡萄糖、琼脂作为各类母种的培养基最为普遍,菌丝都能正常生长。现将常用的培养基配方和配制方法举例介绍。 1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基) 马铃薯(去皮):200g 葡萄糖:20g 琼脂:20g 水:1000mL pH值:自然 2.马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA培养基) 马铃薯(去皮):200g 蔗糖:20g 琼脂:20g 水:1000mL pH值:自然
LB培养基,是微生物学实验中最常用的培养基,用于培养大肠杆菌等细菌,其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。尽管该培养基的名称被广泛解释为Luria-Bertani 培养基,然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法,这个名字来源于英语的 lysogeny broth,即溶菌肉汤。
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