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Leibovitz's L-15 medium
Leibovitz’s L-15培养基 (含L谷氨酰胺,含酚红)培养条件:
完全培养基:DMEM高糖培养基90%;胎牛血清10%。
培养条件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
Leibovitz’s L-15培养基 (含L谷氨酰胺,含酚红)制备:
1. 分离和培养宿主细胞;
2. 通过病毒介导或者其它的方式将多能性相关的基因导入宿主细胞;
3. 将病毒感染后的细胞种植于饲养层细胞上,并在ES细胞专用培养体系中培养,同时在培养期间根据需要加入相应的小分子物质以促其重编程;
4. 出现ES样克隆后进行IPS细胞的鉴定(细胞形态、特定基因的表达、表观遗传修饰、体外分化潜能等方面)。
细胞生长:贴壁生长
细胞形态:上皮样;多角形
细胞传代:1:2-1:4传代;每周2-3次
Leibovitz’s L-15培养基 (含L谷氨酰胺,含酚红)传代方法:
收到细胞后,取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
一.如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。
二.如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤如下:
1. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml完全培养基,吸出,分到新的培养瓶中。1:3~1:6传代;2~3天1次
Leibovitz’s L-15培养基 (含L谷氨酰胺,含酚红)相关产品如下:hz10071 杂交瘤细胞CD25 PC 61 5.3 细胞
hz10072 杂交瘤(抗CD3) OKT3细胞
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hz10106 谢氏丙酸杆菌
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hz10108 小鼠自发高乳腺癌细胞,TA2细胞
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hz10110 小鼠脂肪细胞,L13T3细胞
hz10111 小鼠脂肪细胞,3T3-L1细胞
hz10112 小鼠正常肝细胞,NCTC1469细胞
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文献和实验NaHCO3 浓度的 Earle's 平衡盐溶液,并且由培养箱维持 5~10% CO2。通常,1.2~2.2g/L NaHCO3 配合 5% CO2,3.7 g/L NaHCO3 配合 10% CO2。精确的计量因培养基配方而不同。除了 Leibovitz's L-15 (ATCC No.30-2008),ATCC 所有培养基都要匹配 5% CO2。绝大多数 ATCC 培养基含 1.5g/L NaHCO3 以及额外的丙酮酸钠。而 Gibco Hyclone 很多品牌的培养基里都含有 3.7 g/L
、 HEPES( 羟乙基哌嗪乙硫磺酸 )10—50mmol/ml 可防止 pH 变化。 含 Earle's 缓冲系统的培养基适合于 5 % CO 2 的培养条件, Hanks' 缓冲系统的培养基仅含有 0.35g /L NaHCO 3 ,不能用于 5 % CO 2 的环境,若放入 CO 2 培养箱,溶液将迅速变酸,使用时应注意。 湿度和光 开放培养相对湿度控制在 95% 。细胞培养需避光,紫外线或可见光可造成核黄素、酪氨酸、色氨酸等产生有毒的光产物,抑制细胞生长,降低其贴壁能力。 影响细胞
冲系统和调节CO2含量,维持正常pH。 开放培养要求5%CO2环境、HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸)10—50mmol/ml可防止pH变化。 含Earle’s缓冲系统的培养基适合于5%CO2的培养条件,Hanks’缓冲系统的培养基仅含有0.35g/L NaHCO3,不能用于5%CO2的环境,若放入CO2培养箱,溶液将迅速变酸,使用时应注意。 湿度和光 开放培养相对湿度控制在95%。细胞培养需避光,紫外线或可见光可造成核黄素、酪氨酸、色氨酸等产生有毒的光产物,抑制细胞生长,降低其贴壁能力。 影响
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