【支原体染色检测试剂盒】科研用

操作步骤（仅供参考）：
(一)贴壁细胞
1、取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5 分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用无菌的PBS或生理盐水洗涤3次，再用细胞培养液洗涤1次。将盖玻片置于6孔板或其他培养皿内，接种细胞培养过夜，使融合率约为50%~80%。
2、加入干预条件使细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入Hoechst固定液0.5ml,固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
3、去除固定液，用PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体，洗涤时宜用摇床或手动晃动。
4、加入Hoechst 33258 染色液0.5ml，孵育5min。也宜用摇床，或手动晃动数次。
5、弃染色液，用PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体，洗涤时宜用摇床或手动晃动。
6、滴一滴抗荧封片剂于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片剂，尽量避免气泡。
7、荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm 左右，发射波长460nm 左右。

（二）
(二)悬浮细胞
1 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内弃液，加入Hoechst固定液0.5ml,缓缓悬起细胞,固定10min或更长时间(亦可4℃过夜).
2 低速离心去除固定液,用PBS或生理盐水洗2次,每次3min,吸尽液体.洗涤时用手晃动数次.
3 低速离心离心后吸去大部分液体保留50ul液体,在缓缓悬起细胞,滴加至载玻片上,尽量使细胞分布均匀.
4 稍晾干,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动.
5 均匀滴上Hoechst 33258 染色液0.5ml,孵育5分钟.用吸水纸从边缘吸去液体,微晾干.
6 弃染色液,用PBS或生理盐水洗2次,每次3min,吸尽液体.洗涤时宜用摇床,或手动晃动.
7 滴一滴抗荧光封片剂于载玻片上,盖上一清洁的盖玻片,尽量避免气泡.
8 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核.激发波长为350nm左右,发射波长为460nm左右.
(三)组织切片
1 常规包埋切片。
2 用PBS或生理盐水洗2次,每次3min.洗涤时手摇晃动数次。
3 均匀滴上Hoechst 33258染色液0.5ml,孵育5分钟。
4 弃染色液,用PBS或生理盐水洗2次.每次3min,吸尽液体.洗涤时宜用摇床,或手动晃动。
5 将切片置于载玻片上,滴一滴抗荧光封片剂,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。
6 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核.激发波长350nm左右，发射波长460nm左右。