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北京鼎国
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文献和实验类型的工作成果。辩别如何在分子水平上的一种膜蛋白的一种方法是,以确定其结构。这包括建立所有原子在三维空间的位置,或至少所有非氢原子,使蛋白质。我们为此目的使用的方法是大分子的X -射线结晶器(MX)。图2显示了一种膜蛋白的结构被确定使用MX的例子。衍射质量的蛋白质晶体是需要做的MX。 显然,使用大分子晶体结构的测定中涉及的许多步骤。通常情况下,这些包括确定膜蛋白的目标,然后生产,提纯和结晶。使用一个家庭或一个同步辐射X射线源的晶体衍射测量上执行。高产与分子模型,然后将其安装的电子密度图的衍射
至200ml。后送至高压灭菌。室温保存。 再配制50×TAE溶液:在400ml蒸馏水中溶解121g Tris碱,加入28.55ml冰乙酸和50ml 0.5ml/L EDTA溶液,再加蒸馏水定容至500ml,室温保存。 (2)琼脂糖溶液(1.0%): 50×TAE溶液取10ml,稀释成500ml,取50ml溶解0.5g琼脂糖,电炉上煮至沸腾,溶化的琼脂物冷却至60℃左右时加入10mg/ml EB 5ul,充分混匀,将温热的凝胶倒入已置好梳子的电泳板中,在室温下放置45min左右后进行电泳
),dTTP(0.65mmol/L)和Dig-dUTP(0.35mmol/L),pH6.5(20℃)。 7、聚合酶Ⅰ大片段(标记级):此管内有25μl 聚合酶Ⅰ大片段(Klenow),2U /μl。 8、(Dig)AP结合物:此管内有200μl多克隆羊抗地高辛配基Fab-片段,结合有碱性磷酸酶750U/ml。 9、NBT:有两管,每管1.25ml,是溶于70%(V/V)二甲基甲酰胺的硝基蓝四唑盐溶液(75mg/ml)。 10、X-磷酸盐:有两管,每管0.9ml,是溶于二甲基甲酰胺的5-溴-4-氯
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