60×15mm细胞培养皿

小鼠肿瘤样本单细胞悬液的制备及注意事项

基或者 PBS 稀释，再用 200 目筛网，除去残留的组织块，并使用5~10倍体积的 1640 基础培养基或者 PBS 缓冲液洗涤一次，过滤至无组织块为止，获得单细胞悬液。 收集细胞悬液，300 g离心5 min，弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬细胞，并调整细胞浓度至 1×107/mL。 研磨法 提前准备好 200 目的一次性细胞筛网，用 1640 基础培养基或者 PBS 润湿并浸泡备用（浸泡放置于 6 cm 细胞培养皿或者 6 孔板）。 将剥离的肿瘤组织转移到 200 目的细胞筛网，用无菌眼科

小鼠单个核细胞的分离

小鼠单个核细胞的分离 基本方案：从脾脏、胸腺和淋巴结制备细胞悬液 实验材料：1. RPMI-5或DMEM-5完全培养基2. 新鲜分离的小鼠器官：≤6周龄的小鼠胸腺；6周至6个月龄的小鼠脾脏和淋巴结3. 60mm×15mm培养皿4. 剪刀和镊子（保存在70%乙醇的烧杯中5. 装有19G针头的6ml注射器6. 200μm尼龙滤网 实验方法：1. 将新鲜分离的器官放入盛有3ml RPMI-5或DMEM

蛋白质印迹（Western blot）实验方案

冰上，用冰冷的 PBS 洗涤细胞。2. 吸出 PBS，然后加入冰冷的裂解缓冲液（每 107 细胞/100 mm 培养皿/150 cm2 培养瓶加入 1 ml；每 5×106 细胞/60 mm 培养皿/75 cm2 培养瓶加入 0.5 ml）。3. 用预冷的塑料细胞刮棒刮下贴壁细胞，然后轻轻地将细胞悬浮液转移至预冷的微量离心管中。4. 在 4 ℃ 下持续搅拌 30 分钟。5. 在 4 ℃ 预冷的离心机中以 16000 × g 的转速离心 20 分钟。6. 轻轻地从离心机中取出离心管，置于冰上。将上清