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文献和实验一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化，不同点如下： 1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其相同。 2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。 3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。 4、免疫荧光在封片时常使用专用封片剂或甘油：0.01M PBS （1：1）。条件许可，建议购买抗淬灭的封片液，使标本可以保存更久。 5、荧光抗体的孵育以及后续处理需要避光。 6、荧光抗体染色假阳性可能会多，需要分别设定阳性和阴性
；Aprotinin,leupeptin,pepstatin:1 microgram/ml each；Na3VO4: 1 mM；NaF: 1 mM 3. 1X SDS 样品缓冲液：62.5 mMTris-HCl(pH 6.8 于 25° C), 2% w/v SDS, 10%甘油,50 mMDTT, 0.01% w/v溴酚蓝 4. 转移缓冲液：25 mM Trisbase, 0.2 M 甘氨酸, 20%甲醇 (pH 8.3) 5. 10X Tris缓冲盐 (TBS)：准备1L
漂洗2次，每次5min; 9.加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1h; 10.PBS漂洗2次，每次5min; 11.5ug/ml DAPI染色2min; 12.抗淬灭封片剂封片。 抗淬灭封片剂: 2.5% DABCO (w/v) 50mM Tris(pH8.0) 90%甘油
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