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上海信裕
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见说明
雷帕霉素靶蛋白放免试剂盒说明书
mTOR(HY-10223) RIA KIT
雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种非典型高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其特异性抑制剂为雷帕霉素,当雷帕霉素与之结合后可抑制其激酶活性。mTOR对生长因子、营养物质、机体能量状态等刺激产生应答,调节细胞生长、增殖、代谢、调控细胞周期等,因此与许多疾病相关,例如心血管疾病、炎症、肿瘤、代谢性疾病和神经性疾病等。
标本的收集:空腹抽静脉血2ml离心取血清,-20℃保存三个月。
反应原理:采用竞争机制原理,标准品或样本中的MTOR和加入的125I –MTOR(标记的MTOR抗原)共同与一定量的特异性抗体产生竞争性免疫反应。 125I –MTOR(标记的MTOR抗原)与抗体的结合量与标准或样品中的MTOR的含量呈一定的函数关系。用免疫分离剂将结合部分和游离部分分离后,测定结合部分的结合率作图,即得标准抑制曲线。从标准曲线上查知对应结合率的待测样品中MTOR的含量。
该药盒主要应用范围:
心血管疾病
代谢性疾病
肿瘤疾病
雷帕霉素靶蛋白放免试剂盒说明书药盒组成:(常温运输,4℃保存)
1. MTOR 缓冲液1瓶
2. MTOR(第二抗体)1瓶,用前充分摇匀。
3. MTOR标准品6瓶,浓度为3.12、6.25、12.5、25、50、100pg/ml
4. MTOR抗体 1瓶。
5. 125I –MTOR 1瓶
雷帕霉素靶蛋白放免试剂盒说明书测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
MTOR RIA加液程序 (单位: ul )
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试 剂 T NSB S0 S1~S5 样 品
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缓 冲 液 —— 200 100 —— ——
标 准 品 —— —— —— 100 ——
样 品 —— —— —— —— 100
抗 体 —— —— 100 100 100
125I-MTOR 100 100 100 100 100
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摇匀4℃ 放置24小时
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分 离 剂 —— 500 500 500 500
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混匀,室温放置15分钟后,3500 转/分 4℃离心20 min,弃上清液,测沉淀cpm数。
结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值,或由自动r计数仪预先编制程序。直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
雷帕霉素靶蛋白放免试剂盒说明书注意事项:
本月标准品每瓶用 ml 缓冲液稀释
本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液溶解
本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
本试剂盒主要技术指标:
1、 NSB:<6.8%。
2、 灵敏度:<0.3pg/ml
3、 标准曲线范围:3.125-100pg/ml
4、 批内变异系数:CVw<7.3%;
批间变异系数:CVw <8.1% 。
5、 正常参考值:16pg/ml±6.1pg/ml各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
本月药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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xyS509Ge 【中文名称】:维生素D(VD)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Vitamin D (VD) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyB510Hu 【中文名称】:人白介素5受体α(IL5Rα)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Interleukin 5 Receptor Alpha (IL5Ra) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC179Ge 【中文名称】:伴刀豆球蛋白A(ConA)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Concanavalin A (ConA) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyB859Bo 【中文名称】:牛凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX1)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Lectin Like Oxidized Low Density Lipoprotein Receptor 1 (LOX1) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA097Ov 【中文名称】:绵羊基质金属蛋白酶1(MMP1)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 1 (MMP1) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyJ332Bo 【中文名称】:牛酪蛋白β(CSN2)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Casein Beta (CSN2) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyB626Hu 【中文名称】:人白介素10受体α(IL10Rα)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Interleukin 10 Receptor Alpha (IL10Ra) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyX655Ge 【中文名称】:大肠杆菌宿主残留蛋白(ECP)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Escherichia coli Protein (ECP) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA033Ov 【中文名称】:绵羊干扰素α(IFNα)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Interferon Alpha (IFNa) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyB309Bo 【中文名称】:牛多效生长因子(PTN)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Pleiotrophin (PTN) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyB441Hu 【中文名称】:人溶酶体关联膜蛋白1(LAMP1)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Lysosomal Associated Membrane Protein 1 (LAMP1) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyT653Hu 【中文名称】:人CD200受体2(CD200R2)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for CD200 Receptor 2 (CD200R2) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyJ550Hu 【中文名称】:人胆绿素还原酶B(BLVRB)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Biliverdin Reductase B (BLVRB) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyJ551Hu 【中文名称】:人胆绿素还原酶A(BLVRA)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Biliverdin Reductase A (BLVRA) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyG962Hu 【中文名称】:人翻译调节肿瘤蛋白1(TPT1)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Tumor Protein, Translationally Controlled 1 (TPT1) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyA036Bo 【中文名称】:牛成纤维细胞生长因子9(FGF9)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 9 (FGF9) 【灵敏度】:9.375pg/mL
xyC099Hu 【中文名称】:人整合素β6(ITGβ6)ELISA试剂盒 【英文名称】:ELISA Kit for Integrin Beta 6 (ITGb6) 【灵敏度】:9.375pg/mL
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文献和实验上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com 大鼠 雷帕霉素靶蛋白 (mTOR)ELISA 试剂盒 ( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 ) 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗大鼠 mTOR 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 mTOR 与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠 mTOR ,形成免疫复合物连接在板上
Chromatin Immunoprecipitation(ChIP)实验指南及技术总结
沉降。虽然说明书上说ChIP实验的过程中有几个可以停顿的地方,我还是希望你能够连续把它做完,直到PCR结果出来为止。尽量避免实验中不可预知的影响因素。 (五)关于解交联 虽然说明书上说4小时已经足够,但是我还是希望你可以解交联过夜。因为在那样的环境里,DNA不会降解,过夜解交联更充分些。只是不要忘记在EP管口封上封口膜。 (六)关于DNA片段的回收 需要注意的是:样品中SDS样品较高,普通的PCR产物回收试剂盒回收
蛋白浓度(BCA 法) ① 八个标准孔,按说明书先加 PBS,再加标准蛋白液 ② 目的孔,每孔加 18ulPBS+2ul 目的蛋白 ③ 按说明书配 BCA 工作液,每孔加 200ul ④ 37°放置半小时后测浓度 (4)计算上样量,设计上样顺序 上样体积:上样量/浓度 x 5/4 上样顺序:无处理,对照,处理;体积最好不要相差太大 经验总结: 如何提高蛋白浓度:首先当然是多培养点细胞,多提供点组织啦,其次可以少加点裂解液,裂解时间长点,尽量裂解
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