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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 供应商：
上海信裕
- 检测方法：
见说明
大鼠碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒
本试剂仅供研究使用
试验原理：
ALP试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知ALP浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将ALP和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中ALP的活性浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
| 试剂盒成份（2-8℃保存） | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
| 96/48份酶标板 | 1块板（96T） | 半块板（48T） | 即用型 |
| 塑料膜板盖 | 1块 | 半块 | 即用型 |
| 标准品：400ng/ml | 1瓶（0.6ml） | 1瓶（0.3ml） | 按说明书进行稀稀 |
| 空白对照 | 1瓶（1.0ml） | 1瓶（0.5ml） | 即用型 |
| 标准品稀释缓冲液 | 1瓶（5ml） | 1瓶（2.5ml） | 即用型 |
| 生物素标记的抗ALP抗体 | 1瓶（6ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 亲和链酶素-HRP | 1瓶（10ml） | 1瓶（5.0ml） | 即用型 |
| 洗涤缓冲液 | 1瓶（20ml） | 1瓶（10ml） | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 底物B | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 终止液 | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
自备材料
1． 蒸馏水。
2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3． 振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
大鼠碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒操作注意事项
1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
| 400ng/ml | （6号标准品） | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。 |
| 200ng/ml | （5号标准品） | 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 100ng/ml | （4号标准品） | 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 50ng/ml | （3号标准品） | 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 25ng/ml | （2号标准品） | 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 12.5ng/ml | （1号标准品） | 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 0ng/ml | （空白对照） | 原始浓度不用稀释直接加入50ul。 |
2． 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
大鼠碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒操作步骤
1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5． 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。
性能
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与人其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
4.局限性：6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
大鼠碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒结果 判 断 与 分 析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的ALP标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的ALP含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-400ng/ml
4、敏感度： 1.0ng/ml
CEA005Eq 【中文名称】：马血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Angiotensin II (AngII) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA049Eq 【中文名称】：马干扰素γ(IFNγ)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Interferon Gamma (IFNg) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA553Eq 【中文名称】：马基质金属蛋白酶9(MMP9)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 9 (MMP9) 【灵敏度】：9.375pg/mL
CEA506Eq 【中文名称】：马D-二聚体(D2D)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for D-Dimer (D2D) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA843Fi 【中文名称】：鱼促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Gonadotropin Releasing Hormone (GnRH) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA122Fi 【中文名称】：鱼基质细胞衍生因子1(SDF1)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Stromal Cell Derived Factor 1 (SDF1) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA278Fi 【中文名称】：鱼踝蛋白(TLN)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Talin (TLN) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA035Fi 【中文名称】：鱼成纤维细胞生长因子6(FGF6)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 6 (FGF6) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA927Ge 【中文名称】：组胺(HIS)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Histamine (HIS) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA285M1 【中文名称】：组蛋白H3(H3)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Histone H3 (H3) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA289M1 【中文名称】：组蛋白H4(H4)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Histone H4 (H4) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyQ004M1 【中文名称】：组蛋白1簇H4a(HIST1H4A)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Histone Cluster 1, H4a (HIST1H4A) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA398Ge 【中文名称】：脱氢表雄酮(DHEA)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Dehydroepiandrosterone (DHEA) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA894Ge 【中文名称】：脱氧吡啶酚(DPD)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Deoxypyridinoline (DPD) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA808Ge 【中文名称】：5-羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for 5-Hydroxytryptamine (5-HT) 【灵敏度】：9.375pg/mL
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文献和实验相关实验
大鼠碱性磷酸酶 (ALP) 酶联免疫分析（ ELISA ） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中 碱性磷酸酶(ALP) 的 含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠 碱性磷酸酶 (ALP) 水平。用纯化的大鼠 碱性磷酸酶 (ALP) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 碱性磷酸酶 (ALP
碱性磷酸酶检验参考范围及临床意义： 英文缩写：ALP； 正常参考值：30-115IU/L ； 医|学教育网临床意义：增高常见于肝癌，肝硬化，阻塞性黄疸，急慢性黄疸型肝炎，骨细胞瘤，骨折及少年儿童。
在血及骨髓涂片中的成熟中性粒细胞碱性磷酸酶染色呈阳性反应，中性晚幼粒偶呈弱阳性，但因实验室条件不同参考值常有差异。一般认为阳性率平均为10%～30%，积分在50分以下。 【临床意义】 中性粒细胞碱性磷酸酶活性增高可见于：严重化脓性感染、急淋、再生障碍性贫血、类白血病反应、多发性骨髓瘤、浆细胞白血病、恶性淋巴瘤及骨髓纤维化等。 中性粒细胞碱性磷酸酶活性减低可见于：病毒感染、急粒、慢粒、粒细胞缺乏症、恶性组织细胞增生症、传单、恶性贫血及阵发
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