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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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大量
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上海信裕
- 检测方法：
见说明
大鼠溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)检测试剂盒
本试剂仅供研究使用
试验原理：
BrdU试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BrdU浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将BrdU和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中BrdU的活性浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
| 试剂盒成份（2-8℃保存） | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
| 96/48份酶标板 | 1块板（96T） | 半块板（48T） | 即用型 |
| 塑料膜板盖 | 1块 | 半块 | 即用型 |
| 标准品：400ng/ml | 1瓶（0.6ml） | 1瓶（0.3ml） | 按说明书进行稀稀 |
| 空白对照 | 1瓶（1.0ml） | 1瓶（0.5ml） | 即用型 |
| 标准品稀释缓冲液 | 1瓶（5ml） | 1瓶（2.5ml） | 即用型 |
| 生物素标记的抗BrdU抗体 | 1瓶（6ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 亲和链酶素-HRP | 1瓶（10ml） | 1瓶（5.0ml） | 即用型 |
| 洗涤缓冲液 | 1瓶（20ml） | 1瓶（10ml） | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 底物B | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
| 终止液 | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
自备材料
1． 蒸馏水。
2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3． 振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
大鼠溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)检测试剂盒操作注意事项
1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
| 400ng/ml | （6号标准品） | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。 |
| 200ng/ml | （5号标准品） | 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 100ng/ml | （4号标准品） | 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 50ng/ml | （3号标准品） | 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 25ng/ml | （2号标准品） | 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 12.5ng/ml | （1号标准品） | 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
| 0ng/ml | （空白对照） | 原始浓度不用稀释直接加入50ul。 |
2． 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
大鼠溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)检测试剂盒操作步骤
1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5． 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。
性能
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与人其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
4.局限性：6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
大鼠溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)检测试剂盒结果 判 断 与 分 析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的BrdU标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的BrdU含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-400ng/ml
4、敏感度： 1.0ng/ml
XYJ246Mu 【中文名称】：小鼠DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for DNA Methyltransferase 3B (DNMT3B) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYD475Mu 【中文名称】：小鼠胰高血糖素样肽1受体(GLP1R)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Glucagon Like Peptide 1 Receptor (GLP1R) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYB201Mu 【中文名称】：小鼠接触蛋白1(CNTN1)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Contactin 1 (CNTN1) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYB918Mu 【中文名称】：小鼠蛋白激酶Cα(PKCα)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Protein Kinase C Alpha (PKCa) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYG316Mu 【中文名称】：小鼠Corin蛋白(CRN)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Corin (CRN) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYB364Mu 【中文名称】：小鼠乳腺癌易感蛋白2(BRCA2)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Breast Cancer Susceptibility Protein 2 (BRCA2) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYB650Mu 【中文名称】：小鼠主要碱性蛋白(MBP)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Major Basic Protein (MBP) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYL300Mu 【中文名称】：小鼠CD5抗原样蛋白(CD5L)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for CD5 Antigen Like Protein (CD5L) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYC106Mu 【中文名称】：小鼠骨成型蛋白10(BMP10)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 10 (BMP10) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYC937Mu 【中文名称】：小鼠鞘氨醇1磷酸酯受体1(S1PR1)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Sphingosine 1 Phosphate Receptor 1 (S1PR1) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYB792Mu 【中文名称】：小鼠S100钙结合蛋白A8(S100A8)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A8 (S100A8) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYB793Mu 【中文名称】：小鼠S100钙结合蛋白A9(S100A9)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A9 (S100A9) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYJ822Mu 【中文名称】：小鼠B-细胞κ-轻肽基因增强子抑制因子激酶β(IκBKβ)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Inhibitor Of Kappa-Light Polypeptide Gene Enhancer In B-Cells Kinase Beta (IkBKb) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYA549Mu 【中文名称】：小鼠角蛋白9(KRT9)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Keratin 9 (KRT9) 【灵敏度】：9.375pg/mL
XYB817Mu 【中文名称】：小鼠多功能蛋白聚糖(VS)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Versican (VS) 【灵敏度】：9.375pg/mL
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上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com 人 溴脱氧核苷尿嘧啶 ( BrdU )ELISA 试剂盒 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 BrdU 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 BrdU与单抗结合，加入生物素化的抗人 BrdU ，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin
染色，导致染色弥散，准确性降低等问题。哈佛大学医学院细胞生物学家Adrian Salic就认为：“为了能够暴露BrdU的抗原表位，必须用高浓度的盐酸，乙酸或酶解，但经历了如此严重的处理后，细胞原本精巧细致的结构在显微镜下就变得惨不忍睹了。” 事实上，现在有一种新的检测方法能避免这种情况的发生----EdU检测。EdU (5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷)也是一种胸腺嘧啶核苷类似物，但其连有的炔羟基团在天然化合物中很少见，在细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中，基于EdU与染料的共轭反应
大学医学院细胞生物学家Adrian Salic就认为：“为了能够暴露BrdU的抗原表位，必须用高浓度的盐酸，乙酸或酶解，但经历了如此严重的处理后，细胞原本精巧细致的结构在显微镜下就变得惨不忍睹了。” 事实上，现在有一种新的检测方法能避免这种情况的发生——EdU检测。EdU （5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷）也是一种胸腺嘧啶核苷类似物，但其连有的炔羟基团在天然化合物中很少见，在细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中，基于EdU与染料的共轭反应可以进行高效快速的细胞增殖检测分析，可以有效地检测处于S期
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大鼠溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)检测试剂盒
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