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- 提供酪蛋白酶谱MMP（3/7/10）实验
- 全国
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称：
酪蛋白酶谱MMP(3/10)实验
- 提供商：
长沙南科生物技术有限公司
- 规格：
200元/每样本
酪蛋白酶谱MMP(3/10)：本方法采用酶谱法(zymography)检测MMP-3/10活性，Zymography是一种基于SDS-PAGE电泳的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM (10~100 pg)，高于ELISA方法。通过制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶，含蛋白酶的样品在凝胶进行电泳，电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育，凝胶进行考马斯亮蓝染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-3/10的大小位置(酶谱)及活性。
样品准备要求：
1）血浆/血清/上清或体液样品准备：血浆或血清样本加入1/10体积的柠檬酸钠，1000rpm离心20分钟，留取上清，以BCA法测定蛋白浓度，测定浓度以后，取约30ug蛋白上样进行电泳检测。样本准备后可暂时4℃保存，不立即测定的样品需-70℃保存，但不宜超过10天。
2）组织样本准备：取100mg新鲜组织以2ml匀浆液进行匀浆（匀浆剂：0.1M Tris/ HCl/pH 7.4 ,0.5% TritonX-100，0.1mg/ml PMSF），12000g 4℃离心5分钟，移取上清层至另一新的1ml离心管待测，取30ug蛋白上样进行电泳检测。样本准备以后，样品可暂时4℃保存，不立即测定的样品需-70℃保存，但不宜超过10天。
3）细胞样本准备：取1个6孔板细胞（每孔细胞量约2×106个细胞），离心后以500ul匀浆液进行超声匀浆（匀浆剂：0.1M Tris/HCl/pH 7.4 ,0.5% TritonX-100，0.1mg/ml PMSF），12000g 4℃离心5分钟，移取上清层至另一新的1ml离心管待测，取30ug蛋白上样进行电泳检测。样本准备以后，样品可暂时4℃保存，不立即测定的样品需-70℃保存，但不宜超过10天。
酶谱电泳图-酪蛋白酶谱
实验周期：10-15个工作日内完成，重复检测优惠。
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文献和实验扫描仪中，都采用机械式的二维X，Y线性扫描技术实现，即X，Y方向都采用直线驱动器和直线导轨实现往复运动。此类装置，由于驱动系统的频率限制，驱动器的扫描惯性大，使得扫描效率低，分析时间相当长；并且往复行程长，对直线导轨的精度要求相当高。二、光机结合的二维扫描系统为同样实现生物芯片的二维扫描，我们的实验装置设计如图2，采用了振镜和大数值孔径的远心f-è物镜相结合实现X方向扫描，Y方向的运动仍采用直线驱动器和直线导轨实现。 系统中，对于f-è物镜，满足x＝2fè（è为振镜的摆动角度，f为物镜焦距）的线性
（3）同上。两个磷酸化位点都要做，但是可能在不同的病理条件下，侧重点有所不同，这主要体现在你的论文的讨论中。因此建议实验前多做论文研究，查阅一下别人的发表文章，看看与你的病理模型更相关的是哪个位点。 真爱满行囊 非常感谢你 的回复，现在我遇到的问题是我做出来蛋白总量还有216位点是有变化的，9位因为买的是santa curz的抗体，现在死活做不出来，很头痛，我要说明的问题是他的活性降低，我也看到216位点磷酸化水平降低了，可是现在没有第九位的结果（就是没有办法得到第九
2：选择浸泡后加洗次数。F 2F1（01）浸泡后清洗一次，F2F1（10）浸泡后清洗二次，F2F1（11）浸泡后清洗三次。 F wet（湿）-F dry（干）选择板在最终洗完后是湿还是干。 2）旋钮功能： volume（液量）：调节阀门的开启时间来调整洗液量1×50?滋l。 washes（清洗次数）；设定浸泡前的洗板次数。 pause（暂停）：设定洗板过程中的暂停时间（秒） soak（浸泡）：设置洗板程序完成后的一段浸泡时间1×0.5min。 3. 注意事项
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