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酪蛋白酶谱MMP(3/7/10
酪蛋白酶谱MMP(3/10)实验
长沙南科生物技术有限公司
200元/每样本
酪蛋白酶谱MMP(3/10):本方法采用酶谱法(zymography)检测MMP-3/10活性,Zymography是一种基于SDS-PAGE电泳的蛋白酶检测方法,其灵敏度可达1 nM (10~100 pg),高于ELISA方法。通过制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶,含蛋白酶的样品在凝胶进行电泳,电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育,凝胶进行考马斯亮蓝染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶条带的位置,蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮区域,从而能同时指示MMP-3/10的大小位置(酶谱)及活性。
样品准备要求:
1)血浆/血清/上清或体液样品准备:血浆或血清样本加入1/10体积的柠檬酸钠,1000rpm离心20分钟,留取上清,以BCA法测定蛋白浓度,测定浓度以后,取约30ug蛋白上样进行电泳检测。样本准备后可暂时4℃保存,不立即测定的样品需-70℃保存,但不宜超过10天。
2)组织样本准备:取100mg新鲜组织以2ml匀浆液进行匀浆(匀浆剂:0.1M Tris/ HCl/pH 7.4 ,0.5% TritonX-100,0.1mg/ml PMSF),12000g 4℃离心5分钟,移取上清层至另一新的1ml离心管待测,取30ug蛋白上样进行电泳检测。样本准备以后,样品可暂时4℃保存,不立即测定的样品需-70℃保存,但不宜超过10天。
3)细胞样本准备:取1个6孔板细胞(每孔细胞量约2×106个细胞),离心后以500ul匀浆液进行超声匀浆(匀浆剂:0.1M Tris/HCl/pH 7.4 ,0.5% TritonX-100,0.1mg/ml PMSF),12000g 4℃离心5分钟,移取上清层至另一新的1ml离心管待测,取30ug蛋白上样进行电泳检测。样本准备以后,样品可暂时4℃保存,不立即测定的样品需-70℃保存,但不宜超过10天。
酶谱电泳图-酪蛋白酶谱
实验周期:10-15个工作日内完成,重复检测优惠。
长沙南科生物技术有限公司电话、传真:0731-84780916
负责人陆勇:18229848048、14726920250邮箱:nkbioo@163.comQQ:1808014122
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