生长素GHRELIN放免试剂盒操作说明书
GHRELIN (HY-10034) RIA KIT
GHRELIN是一种含28个氨基酸残基的脑肠肽,主要由胃黏膜的内分泌细胞分泌,是生长激素促分泌素受体(GHS-R)的一种内源性配体,1999年由日本国立循环器病中心Kojima等[1]人从小鼠和人的胃组织中成功分离并鉴定.Ghrelin系由28个氨基酸构成的多肽,能够和GHS-R结合而刺激生长激素GH的分泌.就目前的研究报道来看,Ghrelin除调节生长激素分泌外,还在能量平衡、胃功能、心血管系统以及肿瘤生长等诸多方面表现出重要的生物学效应.
标本采集:采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml(含150 IU以上)和10%EDTA.Na2 30uL,采血后立即置冰中,30分钟内4℃下2000转/分,离心15分钟取血浆置-20℃待测,可保存3-6个月。
生长素GHRELIN放免试剂盒药盒组成:
1、GHRELIN抗体一瓶。 2、125I-GHRELIN 标记一瓶。
3、缓冲液一瓶。 4、分离剂(第二抗体)一瓶。
5、GHRELIN标准品1瓶,倍比稀释浓度为:10、 20、40、80、 160、320、640、1280ng/ml
生长素GHRELIN放免试剂盒测定方法:
ghrelin RIA 操作程序 (单位:ul)
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试 剂 T NSB S0 S1~S6 样 品
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缓 冲 液 —— 200 100 —— ——
标 准 品 —— —— —— 100 ——
样 品 —— —— —— —— 100
抗 体 —— —— 100 100 100
125I-ghrelin 100 100 100 100 100
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摇匀,4℃ 24小时
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分 离 剂 —— 500 500 500 500
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混匀,室温放置20分钟,4℃3500转/分 离心15分钟,去上清,测定沉淀cpm值。
结果计算:
以N/T、B/T计算NSB、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测物结合百分率,
在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果.
生长素GHRELIN放免试剂盒注意事项:
本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标准品每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
测定前,血浆标本推荐过C18拄。
附:血浆标本过柱步骤:
1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A ),在4℃下3500转/分 离心20分钟,取上清。
2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA,即为缓冲液B,将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C18 柱进行平衡,接着用缓冲液A 3ml 冲洗。
3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C18柱中。
4、用缓冲液A 5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C18 柱。
5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C18,速度为1ml/3分钟,并收集上述淋洗液。
6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中,-42℃ 冷冻干燥 ,备用。
7、取干燥后的西林瓶用500 ul 0.05M PH 7.4 PB 进行溶解,并在振荡器上振荡3分钟。实验
时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。
Sep-Pak C-18: Waters.inc. Massachusetts.USA TFA:SIGMA .CO .USA 药盒不提供上述二种
试剂(或材料)。
正常参考值:55.25-95.140ng/ml 78.25±11.29ng/ml
本月药盒参考数据:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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xy-E11394 人碱性胎儿蛋白(BFP)ELISA试剂盒 Human basic fetoprotein (BFP) ELISA kit
xy-E11395 人抗风疹病毒IgM抗体(anti-RV IgM)ELISA试剂盒 Human anti- rubella IgM antibody (anti-RV IgM) ELISA kit
xy-E11396 人催产素(OT)ELISA试剂盒 Human oxytocin (OT) ELISA kit
xy-E11397 人妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)ELISA试剂盒 Human pregnancy-associated plasma protein A (PAPP-A) ELISA Kit
xy-E11398 人抗子宫内膜抗体(EMAb)ELISA试剂盒 Human anti-endometrial antibodies (EMAb) ELISA kit
xy-E11399 人抗精子抗体(AsAb)ELISA试剂盒 Human anti- sperm antibodies (AsAb) ELISA kit
xy-E11400 人妊娠疱疹抗体(HG)ELISA试剂盒 Human pregnancy herpes antibody (HG) ELISA kit
xy-E11401 盘生长因子(PLGF)ELISA试剂盒 Human placenta growth factor (PLGF) ELISA Kit
xy-E11402 人凝血酶(TM)ELISA试剂盒 Human thrombin (TM) ELISA kit
xy-E11403 人凝血因子Ⅶ(FⅦ)ELISA试剂盒 Human coagulation factor Ⅶ (F Ⅶ) ELISA kit
xy-E11404 人可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)ELISA试剂盒 Soluble human leukocyte antigen G (sHLA-G) ELISA kit
xy-E11405 人凝血酶原(PT)ELISA试剂盒 Human prothrombin (PT) ELISA Kit
xy-E11406 人补体因子D(CFD)ELISA试剂盒 Human complement factor D (CFD) ELISA kit
xy-E11407 人血浆纤维连接蛋白(pFN)ELISA试剂盒 Human plasma fibronectin (pFN) ELISA kit
xy-E11408 人细胞纤维连接蛋白(cFn)ELISA试剂盒 Human cell fibronectin (cFn) ELISA kit
xy-E11409 人总蛋白S(TPS)ELISA试剂盒 People total protein S (TPS) ELISA kit
xy-E11410 人血清剥夺反应相关蛋白(SDPR)ELISA试剂盒 Related protein in human serum deprivation response (SDPR) ELISA kit
xy-E11411 人中性粒细胞防御素1-3(HNP1-3)ELISA试剂盒 Human neutrophil defensin 1-3 (HNP1-3) ELISA kit
xy-E11412 人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)ELISA试剂盒 Human eosinophil cationic protein (ECP) ELISA kit
xy-E11413 人血浆抗凝蛋白S(PS) ELISA试剂盒 Human plasma anticoagulant protein S (PS) ELISA kit
xy-E11414 人血浆抗凝蛋白C(PC) ELISA试剂盒 Human plasma anticoagulant protein C (PC) ELISA kit
xy-E11415 人免疫球蛋白G Fc片段(Fcγ)ELISA试剂盒 Human immunoglobulin G Fc fragment (Fcγ) ELISA Kit
xy-E11416 人嗜环蛋白/亲环素B(CyPB)ELISA试剂盒 People addicted to ring protein / cyclophilin B (CyPB) ELISA kit