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标本的采取和保存
可用作可溶性P选择素检测试剂盒测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行
测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检
测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制
备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除
特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本。在可溶性P选择素检测试剂盒中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的可溶性P选择素检测试剂盒测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法可溶性P选择素检测试剂盒中可使本底加深。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。可溶性P选择素检测试剂盒冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。
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文献和实验多采用双抗体夹心ELISA,研究最多的选择素家和免疫球蛋白超家族。前者有E、L、P三型,均可见血液中。溶血性尿毒症和血小板减少性紫癜患者血液中,P选择素比正常人高2~3倍,而败血症、HIV感染和艾滋病患者血液中L选择素明显增高。血液中存在可溶性E选择素是内皮细胞激活的证据,败血症、糖尿病等患者血液中E选择素水平增高,一般与疾病的活动性无关,而与器官受损程度相关。如败血症患者,可溶性E选择素可增高20倍以上,据称与疾病的严重性或预后有关。肝炎、肝硬化等患者血液中超免疫球蛋白家族中ICAM
,在FACS仪上可同时检测有两种不同的细胞粘附分子。3.酶免疫测定法主要为双抗体夹心ELISA,本法应用最广,但仅能检出一群细胞的表面粘附分子数量,而不能反映单个细胞粘附分子数量的变化。 二、可溶性粘附分子的检测 多采用双抗体夹心ELISA,研究最多的选择素家和 免疫球蛋白 超家族。前者有E、L、P三型,均可见血液中。溶血性尿毒症和血小板减少性紫癜患者血液中,P选择素比正常人高2~3倍,而败血症、HIV感染和艾滋病患者血液中L选择素明显增高。血液中存在可溶性
疫性疾病的病理学提供重要见解。 新的药物靶点和治疗策略。一旦发现失衡,就可以开发药物来影响这些酶的活性并纠正失衡,为 医学上至今难以攻克的疾病提供新的治疗策略。例如,许多 HDAC 抑制剂正在开发中,作为对抗 癌症和炎症性疾病(如关节炎和 I 型糖尿病)的新型药物。 对于药物开发活动,根据对 writers 和 erasers 活性的影响,很容易筛选到相应的化合物。 表征组蛋白甲基化通路 一般来说,开发组蛋白甲基转移酶 (HMT) 检测试剂盒充满挑战;大多数检测试剂盒存在几个缺点,原 因出
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