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标本的采取和保存
可用作三磷酸肌醇检测试剂盒测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行
测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检
测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制
备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除
特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本。在三磷酸肌醇检测试剂盒中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的三磷酸肌醇检测试剂盒测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法三磷酸肌醇检测试剂盒中可使本底加深。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。三磷酸肌醇检测试剂盒冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。
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文献和实验小鼠 三磷酸肌醇 (IP3) 酶联免疫 分析( ELISA ) 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中 三磷酸肌醇(IP3) 含量。 实验原理 : 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 小鼠 三磷酸肌醇 (IP3) 水平。用纯化的 小鼠 三磷酸肌醇 (IP3) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 三磷酸肌醇 (IP3) , 再与HRP 标记
的产生及其调节(图8-16)。其中某些磷脂酰肌醇产物主要参与信号传递,如IP3为一种第二信使,引起胞浆内Ca 2+ 浓度升高,激活Ca 2+ 浓度升高,激活Ca 2+ 依赖的蛋白激酶。3,4-二磷酸磷脂酰肌醇[phosphatidylinositol3,4-bisphosphate,PtdIns(3,4)P2]及3,4,5-三磷酸磷脂酰肌醇[PtdIns(3,4,5)P3]均可以充当第二信使,在体外可激活PKCζ异型。
PKC系统(protein kinase C system,PKC system)
( diacylglycerol, DAG)和1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)。IP3动员细胞内钙库释放Ca2 到细胞质中与钙调蛋白结合,随后参与一系列的反应;而DAG在Ca2 的协同下激活蛋白激酶C(protein kinase C,PKC),然后通过蛋白激酶C引起级联反应,进行细胞的应答, 故此将该系统称为PKC系统,或称为IP3、DAG、Ca2 信号通路。
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