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1、酶法检测糖化血红蛋白

糖化血红蛋白(HbA1c)是目前糖尿病(DM)实验诊断方法中最常用的血糖监控指标, 它主要反映患者近2～3个月血糖控制的总体水平，自上世纪70年代以来已广泛的应用于DM诊疗的各个方面。糖化血红蛋白的临床实验室检测方法则已从最初的 电泳法、色谱法等发展到如今的免疫比浊法、化学发光法和酶法。近两年应用酶法测定糖化血红蛋白在各实验室相继展开，直接酶法具有良好精密度及准确度，不易 受其他因素干扰，结果准确可靠，方法简便易行。

检测原理：特殊蛋白酶分解血红蛋白（Hemoglobin, Hb），3-5分钟内果糖基氨基酸从Hb分离，后经果糖基氨基酸氧化酶(Fructosaminase, FAOD)产生H₂O₂，H₂O₂与POD与色原N-(羧甲基氨羰基)-4，4'-二甲氨基二苯胺钠盐(DA-64)反应，在751nm测吸光度改变。

2、CNP-NAG 应用于肾损伤早期检测

N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG-ase）在尿中活性的测定，在临床上应用已有20多年的历史。实践证明，它是能早期发现肾脏损害成绩最好的尿酶。 尿中此酶主要来自肾近曲小管上皮细胞，分子量约130-140kd，尿中NAG-ase活性升高，除前列腺炎和精液混入外，是各种肾实质早期损伤的敏感标 志物。参阅20多年来中外文献，测定NAG-ase可以提供许多重要的临床信息。

NAG(EC3.2.1.30)是一种溶酶体酶，广泛分布于人体各组织中，但在前列腺和肾脏近端肾小管中含量最高。NAG分子量约为130-140kd， 在正常情况下，血清中NAG不能通过肾小球滤过从尿中排泄。尿中NAG活性升高，除前列腺炎和精液混入外，常是肾脏损害的标志。尿液NAG总活性及其同工 酶是目前临床上最常用的测定指标。

检测原理：样品中的NAG作用于底物2-氯-4-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡糖糖苷(CNP-NAG)，水解游离出CNP，其生成速度与样品中酶活 性在一定范围内成正比，可在400-405nm测定每分钟吸光度的变化（△A/分），计算NAG的活性。由于色团的pKa为5.5，与NAG-ase的最 适反应pH4.8接近，可在反应条件下直接显色，无需再行碱化，具备了速率法测定的条件。
（1）、性质稳定，干粉可长期保存，制成工作液，条件合适也可稳定至少一周
（2）、操作简单、省时，无需逐个测样品空白，也不必碱化呈色
（3）、有足够的灵敏度，可支持临床检出其相应的目标物。
（4）、有较高的准确性和精密度。

3、CNP-AFU和M-G-CNP-AFU应用于原发性肝癌检测

原发性肝癌（PHC）是我国常见的恶性肿瘤之一，是一种恶性程度高、进展快、预后差、侵袭性强的恶性肿瘤，其死亡率在消化系统恶性肿瘤中列第3位，仅次于 胃癌和食管癌。早诊断、早治疗，是延长生存期、降低死亡率的关键。甲胎蛋白（AFP）是诊断PHC的重要指标，但30%～40%的PHC患者AFP阴性， 因此寻找更特异、敏感的肿瘤标志物和诊断方法是研究肝癌的重要课题。

α-L-岩藻糖苷酶(α-L-Fucosidase, AFU)是一种溶酶体酸性水解酶，存在于人体肝、胰、脑、肺、肾纤维细胞等溶酶体内，以肝肾含量最高，它主要水解含有岩藻糖的脂质，粘蛋白及粘多糖. 正常组织糖苷酶的释放率变化很小(孕妇除外)，从而使血清糖苷酶维持在一定范围内. 血清AFU水平测定以往主要用于该酶缺陷引起的岩藻糖酶缺陷病. 近年来发现肝癌患者血清AFU水平有别于其他肝胆疾病，呈显著性升高，在动物实验中观察到morris鼠肝癌组织中AFU活力较正常肝脏高7倍，可作为一 项肝癌非特异性标志物用于本病的诊断，其阳性率为73.9%～81%，特异性为90%. 在AFU阳性与阴性肝癌患者中，AFU阳性率之间无明显差异。

检测原理：2-氯-4-硝基苯基-α-L-岩藻糖苷（2-Chloro-4-nitrophenyl-Alpha-L- Fucopyranoside, CNP-AFU）被样本中的α-L-岩藻糖苷酶作用水解产生2-氯-4-硝基苯（CNP）, 或者MG-2-氯-对硝基苯酚-α-L-岩藻糖苷(M-G-CNP-AFU)被样本中的α-L-岩藻糖苷酶的作用，水解产生MG和 CNP。测定CNP的吸光度的增加量即可以得到AFU的活性。

CNP-α-L-Fucoside＋H2O →CNP＋α-L-岩藻糖

或MG-CNP-α-L-Fucoside＋H2O →M＋G＋CNP＋α-L-岩藻糖

4、GPDA检测

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶（Glycyl Proline Dipeptidyl Aminopeptidase.GPDA）广泛分布于人的肾脏、结缔组织、唾液腺、淋巴结等组织和人的血清、唾液中。主要功能为分解来自胶原的多肽，对维 护结缔组织和上皮细胞的结构与功能具有重要价值。

自从七十年代，血清GPDA测定被应用于临床以来，GPDA的临床价值得到了深入的研究和广泛的临床应用。临床上主要应用在胃癌的辅助诊断、胃癌是否产生 肝转移的鉴别;同时在原发性肝癌、继发性肝癌中临床价值得到了广泛的应用[1-3]。随着GPDA的广泛使用，在其他疾病，例在乳腺癌、肾早期损害、类风 湿病等等疾病中的研究得到长足的发展。

检测原理：在碱性条件下，GPDA催化底物甘氨酰-脯氨酰-对硝基苯胺对甲苯磺酸盐（Gly-Pro p-nitroanilide p-toluenesulfonate salt, H-Gly-Pro-Pna）水解，生成甘氨酰脯氨酸和黄色的对硝基苯胺，后者可引起在特定波长下吸光度的升高，吸光度升高速率与GPDA活性成正比。

5、亮氨酸氨基肽酶测定

亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase, LAP)是一种蛋白分解酶, 能水解肽链N端并由亮氨酸与其他氨基酸形成肽键的酶, 广泛分布于肝、胰、肾等组织中。当人体肝、胆、胰等组织有病变时, 均可出现血清LAP水平升高。测定血清亮氨酸氨基转肽酶可作为肝病诊断的又一项指标, 对淤胆性肝炎的鉴别诊断、肝道梗阻及胰腺癌的诊断有价值。其肝癌的检出阳性率较ADA高，比GGT 反映肝脏疾病更加灵敏。亮氨酸氨基肽酶（LAP）的检测也可早期反映肾损害的性质和程度，并为临床鉴别肾小球、肾小管损伤提供可能的帮助；其亦可作为妊娠 合并ICP及孕妇和胎儿健康情况动态监测的一项有效指标。

检测原理：采用L-亮氨酸对硝基苯胺盐酸盐(L-Leucine-p-nitroanilide, H-Leu-Pna-HCl, CAS16010-98-3)作为底物, 经LAP水解，通过检测对硝基苯胺(P-nitroaniline)来测定LAP的活性。 具有以下优点:速率法、测试速度快、操作简便、适用于全自动生化分析仪。

6、脯氨酸肽酶(PLD)检测

血清脯氨酸肽酶(Prolidase，PLD)或脯肽酶，是一种广泛存在于人体各组织和细胞的亚氨基肽酶，它催化含有C-末端或2肽的水解，对胶原合成和 细胞生长过程中的再循环起重要作用。其血中水平变化与肝损害程度及肝病慢性化密切相关。脯氨酸肽酶全称为亚氨基2肽酶，是由两个相同的亚单位组成的二聚 体，其分子量为97kD。每个亚单位由492氨基酸组成，富含。人PLD基因位于19号染色体短臂上。整个基因长达140Kb以上，包括14个内含子和 15个外显子。内含子长度从1.0～50Kb，占全部基因的98.60%；外显子长度从45～5286p，共约1.9Kb，仅占全部基因的1.4%。人 PLD表达从5＇末端开始，开放读码框架1.47bp，编码493氨基酸。起始为蛋氨酰基，它随后脱落，位于第2位的基因此封闭成为N-末端的最终氨基 酸，故其原单位仅剩492个氨基酸。

检测原理：PLD活性的测定方法较多．其中比较有实用价值的测定方法是分光光度比色法，其基本原理是以甘氨酰一L一脯氨酸为底物在脯氨酸肽酶的作用下释放出脯氨酸： 然后通过脯氨酸与茚三酮反应生成紫红色化合物来测定所释放出的脯氨酸量，以产物脯氨酸的量来反映PLD的活性。

7、血管紧张素转化酶活性的测定

血管紧张素转化酶(Angiotensin-converting enzyme, ACE)是一种结合糖蛋白，含有锌元素，属二肽羧肽酶。可使血管紧张素I形成具有升血作用的血管紧张素II，后者使血管进一步收缩、血压升高。血管紧张素 转化酶也可使具有降压作用的舒缓激肽灭活，还可能直接作用于肾上腺皮质促进醛固酮的分泌。是肾素-醛固酮系统及缓激肽系统的重要调节因素。血清血管紧张素 I转化酶活性的测定常用于结节病的诊断和活动性诊断。

检测原理：底物N-[3-(2-呋喃基)丙烯酰]-L-苯丙氨酰-甘氨酰-甘氨酸(N-[3-(2-Furyl)acryloyl]-L- phenylalanyl-glycyl -glycine, FAPGG)最大吸收峰在340nm。血管紧张素转化酶酶解FAPGG生产FAP及GG，从而发生在340 nm处吸光度的下降变化，可进行连续监测法。通过测定FAPGG在340nm处吸光度下降的速度可计算出血管紧张素转换酶的活性。

FAPGG ACE FAP + GG

8、胱抑素C水平测定

胱抑素C，也称半胱氨酸蛋白酶抑制剂C( Cystatin C)是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也被称为γ-微量蛋白及γ-后球蛋白，广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中, 是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13.3KD，由122个氨基酸残基组成, 可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。循环中的胱抑素C仅经肾小球滤过而被清除，是一种反映肾小球滤过率变化的内源性标志物