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文献和实验. Li, Z.J. Chen, H. Yang, Tild-CRISPR Allows for Efficient and Precise Gene Knockin in Mouse and Human Cells, Dev Cell 45(4) (2018) 526-536 e5. [4] P.D. Hsu, E.S. Lander, F. Zhang, Development and applications of CRISPR-Cas9 for genome engineering, Cell
CRISPR/Cas 是进行基因编辑的强大工具,可以对基因进行定点的精确编辑。在向导 RNA(guide RNA, gRNA)和 Cas9 蛋白的参与下,待编辑的细胞基因组 DNA 将被看作病毒或外源 DNA,被精确剪切。一、寻找目的基因的靶标使用在线设计网站 CRISPR direct,如需直接复制网址,可在生物学霸后台对话框回复 direct即可。靶点挑选要点:基因敲除靶点应设计在起始密码子附近(包括起始密码子)或者起始密码子下游的外显子范围内。不同 Cas9/gRNA 靶点在基因敲除效率
以下是primer3自动得到的引物,请高手指导,在线等。大写字母为外显子,小写的为内含子。 谢谢!!!! OLIGO start len tm gc% any 3' seq LEFT PRIMER 501 20 61.99 55.00 6.00 2.00 AGCCTGGCCAACGTGTCTAT RIGHT PRIMER 1026 22 59.42 36.36 2.00 0.00 tcgttgctgtttttctgttttc SEQUENCE SIZE: 1250
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