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Caspase-9荧光标记抑制
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胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物 FITC-C6-LEHD-FMK 绿是美国AAT Bioquest生产的荧光底物,激活的caspases在凋亡中占有主导地位,FITC-C6-LEHD-FMK能提供简便灵敏的方法对活细胞中对激活的caspase-9进行检测。FITC-C6-LEVD-FMK在凋亡细胞中具有通透性,无毒性和不可逆结合激活的caspase-9的特点,是带有FITC标记的特异性Caspase 9抑制剂。FITC标记能直接通过荧光显微镜,流式细胞仪或者荧光酶标仪测定激活的Caspase 9。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物 FITC-C6-LEHD-FMK 绿。
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操作方法
以下协议仅提供指导,应根据您的特定需求进行修改。
使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的常规解决方案胱天蛋白酶测定
1.在DMSO中准备10 mM的储备溶液。
2.如下准备2X半胱天冬酶底物(50 µM)分析溶液:50 µL底物原液,100 µL DTT(1M),400 µL EDTA(100 mM),10 mL Tris Buffer(20 mM),pH = 7.4。
3.将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合,并在室温下孵育至少1小时。
4.使用荧光酶标仪监测荧光,或使用酶标仪监测吸光度。
使用细胞渗透性FMK Caspase探针的细胞Caspase测定
1.在DMSO中准备2-5 mM的储备溶液。
2.根据需要处理细胞。
3.通过用20 mM Hepes缓冲液(HHBS)在Hanks中稀释DMSO储备溶液(来自步骤2.1),制备2X渗透性半胱天冬酶底物(20 µM)分析溶液。
4.将等体积的处理过的细胞与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合(来自步骤2.3),并在37°C,5%CO2的培养箱中孵育细胞至少1小时。
5.用HHBS清洗细胞至少一次。
6.通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。
使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞半胱天冬酶测定(仅适用于#13470-13476)
1.通过向小瓶中加入50 µL DMSO制备250X储备液。
3.以1:250的比例将250 X DMSO储备溶液添加到细胞溶液中(例如2 µL至500 µL细胞),并将细胞在37°C,5%CO2的培养箱中孵育1小时。
4.用HHBS清洗细胞至少一次。
5.通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。
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