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荧光法钙离子定量试剂盒 *红色
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西安百萤生物科技有限公司
Amplite 荧光法钙离子定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的钙离子检测试剂盒,钙对所有生物体都是必不可少的,特别是在细胞生理学中,钙离子Ca2+进出细胞质的运动是许多细胞过程的信号。钙是人体中质量第五丰富的元素,它是一种具有许多功能的常见细胞离子信使,也可作为骨骼中的结构元素。钙在调节血管收缩和舒张,神经冲动传递,肌肉收缩和激素分泌中起重要作用。钙的血清水平在人体内的相当有限的范围(9至10.5mg / dL)内受到严密调节。低钙血症和高钙血症都是严重的医学疾病。低钙水平的原因包括慢性肾功能衰竭,维生素D缺乏和严重酒精中毒可能发生的低血镁水平。使用我们专有的红色荧光探针的Amplite 钙检测试剂盒提供了一种在生理解决方案中检测钙的简单方法。荧光酶标仪可以轻松读取荧光信号。 Amplite 钙检测试剂盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行,并且易于自动调整,无需分离步骤。该测定可在30分钟内完成。使用Amplite 钙检测试剂盒,我们检测到的钙含量仅为0.03 mM。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 荧光法钙离子定量试剂盒。
样品实验方案
简要概述
1.准备测定反应混合物(50μL)2.添加钙标准品或测试样品(50μL)3.在室温下孵育5-30分钟4.监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度
溶液配制
1.储备溶液配制
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。1.1Rhod Red 原液(200X):将50μL无菌H2O加入Rhod Red 指示剂(组分A)的小瓶中。
2.标准溶液配制
钙标准溶液配制通过将适量的300mM钙标准品(组分C)稀释到H 2 O中来制备钙标准品,以产生0至3mM的钙浓度。
3.工作溶液配制
将25μLRhodRed 储备溶液(200X)加入5mL测定缓冲液(组分B)中,使总体积为5.025mL。避光。
操作步骤
表1.实心黑色96孔微孔板中钙标准品和测试样品的布局。
CS =钙标准品(CS7-CS1,0.003至3mM),BL =空白对照,TS =测试样品。
表2.每个孔的试剂组成。
1.根据表1和2中提供的布局制备钙标准品(CS),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。
2.向钙标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL工作溶液,使总钙测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μL工作溶液,总体积为50μL/孔。
3.在室温下孵育反应5至30分钟,避光。
4.用Ex / Em = 540 / 590nm的荧光板读数器监测荧光强度。
数据分析
从空白标准孔获得的读数(RFU)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。
图1.使用Amplite 荧光钙定量试剂盒在固体黑色96孔板上测量钙剂量反应。
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