1.准备HHBS缓冲液,10%Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *储备液。 2.1BAPTA的量,AM * CAS 126150-97-8 *使用量:1毫克 2.2所需浓度:2 mM 2.3在合适的容器中,将1mg BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *与653.87μL无水DMSO混合。
3.在HHBS中制备含有10μMBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 * 4,0.08%Pluronic®F-127和2mM丙磺舒的2X工作溶液。 3.1最终孔内浓度BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *:5μM 3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度:0.04% 3.3最终孔内浓度的丙磺舒:1mM 3.4在合适的容器中混合16μLBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *,25.6μL10%Pluronic®F-127和256μL25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为3.2 mL。 注意:对于大多数细胞系,我们建议BAPTA的最终浓度,AM * CAS 126150-97-8 *为4至5μM。 注意:推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02%至0.04%。 注意:推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。 4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的最终浓度调节至以下:5μMBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *,0.04%Pluronic F-127,1mM丙磺舒。